【药典】生物药-基于nanoLC-MS/MS建立对重组蛋白药物中宿主细胞残留蛋白分析方法

检测样品：重组蛋白药物

检测项目：重组蛋白药物中宿主细胞残留蛋白分析

方案概述：本篇以NIST （National Institute of Standards and Technology ）标准品Humanized IgG1κ Monoclonal Antibody（P/N RM 8671 ）为例，建立基于nanoLC-MS/MS高灵敏平台的方法对HCPs进行准确定性和相对定量。

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更新时间2026年04月03日

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方案详细说明相关产品清单

重组蛋白类药物是由遗传修饰的原核或真核宿主细胞培养/发酵产生，在此过程中，宿主细胞也共同产生与正常细胞功能相关的蛋白质，由于细胞凋亡/死亡/裂解，其他非必需蛋白质也可能释放到细胞培养基/发酵液中，因此残留在终产品中的其他蛋白质即为宿主细胞残留蛋白（HCPs）。HCPs的存在主要影响药物的安全性和有效性，如引起机体免疫反应，作为佐剂以增强对药物产品的免疫应答，以及具有蛋白水解活性的HCPs影响药物产品的稳定性[1][2][3]，因此生物医药公司不断优化其纯化工艺，从而控制终产品中HCPs的种类和含量。ICH 的Q6B指导方针指出需采用具有高灵敏度和宽动态范围的方法监测HCPs，要求其含量尽可能的低，甚至低于检测限，不同产品要求不同，一般在1-100ng/mg（1-100ppm）范围内，然而并未规定其检测的具体分析方法。目前Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)因其具有高灵敏度、高通量和易操作优势成为工业界的金标准，但其存在很多限制，包括不能对HCPs进行精准鉴定，低丰度HCPs的检测易受限于高丰度蛋白的干扰，定量动态范围（3个数量级）较低，抗体受限，开发周期长，无法改变已有的方法，缺少校正标准限制定量的准确性，因此需多种检测方法相结合[4]。随着高分辨质谱技术性能的不断提升，已具有高灵敏度和宽的定量动态范围，以及蛋白质组学技术的飞速发展，可实现对未知蛋白质的高通量定性和定量。但由于HCPs含量极低，且酶切后与高含量的主成分存在共洗脱，对低含量HCPs的鉴定仍存在挑战，为进一步提升质谱检测方法的动态范围，需对样品前处理及液相方法进行优化。

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