【药典】生物药-阴离子交换-亲水混合色谱的GlyPaCAXH色谱柱分析人促红细胞生成素（EPO)N糖

检测样品：重组人促红细胞生成素(EPO)

检测项目：N糖唾液酸分布

方案概述：本文考察使用PNG酶，对比非还原酶切和二硫苏糖醇（DTT）还原条件下酶切人促红细胞生成素（EPO）的N糖，使用2-AB标记后在阴离子交换和亲水相互作用双模式下的GlycanPacAXH色谱柱上的以唾液酸数目差异进行分组分离的结果差异。为高唾液酸化的蛋白的N糖分析提供参考。

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更新时间2026年01月08日

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重组人促红细胞生成素（EPO）广泛应用于治疗肾性贫血以及肿瘤等各种慢性疾病所伴发的贫血。EPO 是一种单链的酸性糖蛋白，分子量为 32000-39000Dar,EPO 的糖基包括 3 个 N2 糖链（分别位于 Asp 24，Asp 38，Asp 83）和一个 O 糖链（位于 Ser126）。他们的主要成分是甘露糖，岩藻糖和唾液酸等 [1]。其中，唾液酸在维持 EPO 分子的酸性，阻断细胞表面半乳糖受体结合，防止 EPO 失活等方面有重要作用 [2]。本文采用了非还原酶切和 DTT 还原酶切 N 糖链， 2-AB 标记后，经过 Hypersep AminoPropyl 小柱净化后的糖链样品，在 Glypac AXH 的 HPLC 和 UHPLC 色谱柱上进行分析。 Glypac AXH 混合模式色谱柱通过独特的阴离子交换和 HILIC 双重模式，可以将 N 糖按照唾液酸数目大小进行分组分离，比单纯的 HILIC 模式色谱柱给出更丰富的唾液酸分布信息，非常适合用于 EPO 类高唾液酸化的蛋白的 N 糖唾液酸分布测定。