士锋生物微生物的诱变育种2014/04/03

一、实验目的和内容目的：以紫外线诱变获得用于酱油生产的高产蛋白酶菌株为例，学习微生物诱变育种的基本操作方法。内容：1．对米曲霉(Aspergillsoryzae)出发菌株进行处理，制备孢子悬液。2．用紫外线进行诱变处理。3．用平板透明圈法进行两次初筛。4．用摇瓶法进行复筛及酶活性测定。二、实验材料和用具米曲霉斜面菌种；豆饼斜面培养基、酪素培养基、蒸馏水、0.5%酪蛋白；三角瓶(300mL、500mL)、试管、培养皿(9cm)、恒温摇床、恒温培养箱、紫外照射箱、磁力搅拌器、脱脂棉、无菌漏斗、玻璃珠

士锋生物大肠菌群介绍与检测方法2014/04/02

一、大肠菌群介绍大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非*一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污

士锋生物细菌接种技术及生长表现2014/04/01

由于细菌感染而致病的各种标本及带菌者所需检查的各种标本，往往并非单一的细菌，而混有其它非致病菌（人体正常菌群）。因此当对此标本须作出细菌鉴定时，就必须从标本中分离出致病菌，称为细菌分离培养技术。另外，对已得到可疑病菌进行细菌鉴定及菌种保存等培养，称为纯培养接种技术。（一）平板划线接种法（又称分离培养法）平板划线接种法为zui常用的分离培养细菌的方法，通过平板划线后，可使细菌分散生长，形成单个菌落，有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌。平板分离划线的方法较多，其中以分区划线法与曲线划线法较为常

士锋生物细菌感染的血清学试验2014/03/31

血清学试验指在体外用已知抗体（或抗原）检测抗原（或抗体），是临床细菌性疾病诊断和病原菌鉴定的重要手段之一。血清学试验可分为血清学鉴定和血清学诊断两部分。用已知抗体(即含特异抗体的免疫血清或单克隆抗体等)检测标本中或分离培养物中未知细菌的种、型或细菌抗原，称为血清学鉴定；而用已知细菌或特异性抗原检测患者血清中有无相应抗体及其效价的动态变化，作为某些感染性疾病的辅助诊断，称为血清学诊断。一、血清学鉴定（一）玻片凝集试验用于鉴定细菌的诊断血清有以下几类：l、多价诊断血清：即混合诊断血清，血清中含有两种

士锋生物细菌的染色检查法2014/03/28

作细菌染色检查，首先要制备细菌涂片。制备细菌涂片一般包括涂片、干燥、固定三步。1．涂片：取洁净玻片一张，按以下步骤操作肉汤培养物涂片：①右手拿接种环的黑色胶柄部分，左手托持试管。②接种环以15°角置于酒精灯的外焰中烧灼灭菌，直至金属丝烧红(图1-3)，然后将金属柄部也回旋通过火焰烧灼灭菌。③用右手小指和手掌小鱼肌侧拔掉左手所持试管的棉塞，并立即火焰烧灼试管口灭菌。④用已灭菌冷却的接种环伸入试管中取出菌液(图1-4)。注意勿使沾有菌液的接种环触及试管壁及试管口。⑤再次灭菌试管口，将棉塞在火焰上略加

士锋生物植物细胞死活鉴定2014/03/25

1、用质壁分离法鉴定细胞死活（1）原理活细胞与死细胞在性质上有许多差别，特别是透性的变化zui为明显，活细胞的原生质具有分别透性；而死细胞则为通透性。分别透性是质壁分离的先决条件，因此能发生质壁分离的细胞就表示是活的，不能发生质壁分离的则说明是死的。（2）仪器药品及材料洋葱及其它植物材料、酒精灯、显微镜、小刀、镊子、玻璃片、1M蔗糖（3）实验步骤撕洋葱表皮细胞滴加1M蔗糖中，在显微镜下观察，细胞很快发生质壁分离的，这就是活细胞活着的证据。另把拨取的同样制片，用冷冻，加热，干燥，酒精浸蘸等办法将它

士锋生物肠道杆菌的检测2014/03/24

一、主要肠道杆菌的形态、培养特征（一）形态观察1.大肠杆菌（革兰氏染色标本）革兰氏染色阴性，中等大小球杆菌，两端纯圆，呈现分散排列。2.伤寒杆菌（革兰氏染色标本）革兰氏染色阴性，中等大小球杆菌，散在分布。3.痢疾杆菌（革兰氏染色标本）革兰氏阴性杆菌。（二）培养特性1.大肠杆菌：在普通琼脂平板上形成圆形、中等大小、灰白、半透明，边缘整齐光滑之菌落，有特殊气味。在EMB平板上菌落呈现紫黑色，有金属光泽。在MCK平板上菌落呈红色。2.伤寒杆菌：在普通琼脂平板上菌落为园形，中等大小、灰白、半透明，边缘整

士锋生物植物细胞的悬浮培养技术2014/03/21

将游离的植物细胞或小的细胞团置于液体培养其中进行培养和生长的一种技术，称为植物细胞悬浮培养。它是从愈伤组织的液体培养基础上发展起来的一种新的培养技术。从50年代起，米尔（Muir）等便对单细胞培养进行了探讨和研究，得到了万寿菊，烟草单细胞和细胞团的悬浮液。1958年斯图尔德（F.C.Steward）等进行了胡萝卜愈伤组织的悬浮培养，并得到了完整的再生植株。三十多年来，从试管的悬浮培养发展到大空量的发酵罐培养，从不连续培养发展到半连续和连续培养。80年代以来，作为生物技术中的一个组成部分，正在发展

士锋生物苏云金杆菌的部分生化试验鉴定2014/03/20

一、目的要求：应用生物化学技术对昆虫病原细菌进行鉴定，乃是一种十分简便快速的方法，鉴定苏云金杆菌的生化指标是：V、P反应，卵磷脂酶，蛋白水解，吐温酶，水杨素，七叶灵、蔗糖、甘露糖、表膜、酶、淀粉、几丁质酶、精氨酸脱羟酶等。本实验是通过简单的生化测定来了解苏云金杆菌的生化鉴定技术。二、实验材料：1、天平2、电炉3、药勺4、量筒5、烧杯6、pH试纸7、高压锅（手提式）8、接种环三、实验内容：1、各种糖、糖利用：蛋白胨1%琼脂2%蔗糖（甘露糖）1%（水杨素为0.5%）1%酸性复红水溶液0.5%蛋白胨加

植物组织中脂肪氧化酶活力的测定2014/03/18

脂肪氧化酶（LOX）是一种含非血红素铁的蛋白质，专一催化具有顺、顺-1,4-戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸加氧反应，氧化生成具有共轭双键的过氧化氢物。它广泛存在于高等植物体内，与植物的生长发育、植物的衰老、脂质过氧化作用和光合作用、伤反应及其他胁迫反应等有关。【原理】根据基质浓度一定、反应体系中溶解氧浓度的变化与酶活力大小呈线性相关的原理进行测定。LOX氧化多元不饱和脂肪酸形成具有共轭双键的过氧化氢物时消耗氧气，溶液中氧浓度的减少速率与酶活力大小成正比，利用氧电极可以地测定酶活力。【仪器与用具】氧

士锋生物管碟法测定抗生素效价2014/03/17

原理抗生素的生物检定是以抗生素对微生物的抗菌效力作为效价的衡量标准，具有与应用原理相一致、用量少和灵敏度高等优点。管碟法是琼脂扩散法中的一种，已被各国药典广泛采用，作为法定的抗生素生物检定方法。当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（zui低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的抑菌圈。根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系。三、实验材料1、四环素类抗生素的标准

士锋生物植物组织培养和植物快速繁殖2014/03/13

组织培养是一种利用人工培养基（液）使细胞在体外发育和繁殖的技术。除了能够为许多实验提供大量的动植物细胞材料之外，它也是一项克隆植物细胞和个体的实用技术。实际上，在日常生活中*的蔬菜、花卉及粮食作物中，许多种类都是克隆植物，例如，脱病毒马铃薯和红薯、百合和兰花、水稻等等。病毒是威胁园艺和蔬菜种植的主要问题之一。目前仍然没有防治药物。事实上，利用分生组织细胞克隆的方法，可以有效地防治病毒。病毒主要通过媒介昆虫或其他原因造成的植物茎叶损伤入侵植物体。在植物细胞中繁殖的病毒还可以不断感染其相邻的细胞，z

士锋生物植物光周期现象的观察2014/03/11

一、原理许多植物需经过一定的光周期（photoperiod）才能开花。并已知叶是感受光周期影响的器官。在一定的光周期条件下，叶内形成某些特殊的代谢产物，传递到生长点，导致长点形成花芽。在自然光照条件下，人为地给予植物以短日照、间断白昼、间断黑夜等处理，以了解昼夜光和黑暗的交替及其长度对苍耳、大豆、水稻等短日作物开花结实的影响。二、材料与设备：1.大豆幼苗或苍耳幼苗；2.黑罩（外面白色）或暗箱；3.暗柜或暗室；4.日光灯或红色灯泡（60～100瓦）；5.光源定时开关自动控制装置。三、实验步骤当大豆

士锋生物微量定容测压法测定植物的呼吸速率2014/03/10

一、原理微量检压计不仅用来研究有机体或部分组织的呼吸作用和发酵作用，而且也可以研究有关O2与CO2及其它气体交换的反应。如光合作用，酶的活性等。测压法的原理是在固定体积并保持恒温的密闭系统中，气体产生或消失的总量，可以利用气体定律计算求得。二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：待测的小麦、水稻萌发种子。（二）仪器设备：1.瓦布格呼吸计（微量呼吸检质计）；2.移液管；3.量筒；4.小镊子；5.称量瓶。（三）试剂：1.20％KOH；2.凡士林；3.橡皮筋数根；4.吸水纸；5.Brodie氏溶液：NaC

士锋生物叶绿素含量的测定2014/03/07

一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度

技术讲解：国兰的无土栽培技术2014/03/06

一、植料国兰无土栽培的植料可分为有机植料和无机植料两大类：（1）有机植料分蛇木屑，朽树皮等硬植料和木炭，谷皮，水苔，椰糠等软植料两种。有机植料一般用洁水冲洗后，摊于室外让烈日暴晒或用蒸气高温消毒2小时，也可用5％的石灰水浸泡24小时后捞出，再冲洗干净，晒干备用。（2）无机植料分三类：1沙石类：火山石，风化石，高磷石，海浮石，蛭石，珍珠岩，粗河沙，河滩上的小石子等。2：火煅类：空心陶粒，砖瓦碎片，陶瓷窑土粒等。3：塑料类：发泡塑料块，发泡塑料筋（水果网套袋）。无机植料一般无需什么消毒，只用洁水冲洗

士锋生物菌种保藏的几种常用方法2014/03/05

微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于zui不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。保藏方法大致可分为以下几种：1．传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。2．液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭

士锋生物质壁分离法测定植物细胞的渗透势2014/03/03

将植物组织放入一系列不同浓度的蔗糖溶液中，经过一段时间，植物细胞与蔗糖溶液间将达到渗透平衡状态。如果在某一溶液中细胞脱水达到平衡时刚好处于临界质壁分离状态，则细胞的压力势ψp下降为零。此时细胞液的渗透势ψs等于外液的渗透势ψs0，即ψs=ψs0，此溶液称为该组织的等渗溶液，其浓度称为该组织的等渗浓度，因此，只要测出植物组织的等渗浓度，即可计算出细胞液的渗透势ψs。实际测定时，由于临界质壁分离状态难以在显微镜下直接观察到，故一般均以初始质壁分离作为判断等渗浓度的标准。处于初始质壁分离状态的细胞体积

士锋生物影响消毒剂[disinfector作用的因素2014/02/27

（1）消毒剂的性质、浓度与作用时间各种消毒剂的理化性质不同，对微生物的作用大小也差异。例如表面活性剂对革兰氏阳性菌的灭菌效果比对革兰氏阴性菌好，龙胆紫对葡萄球菌的效果特别强。同一种消毒剂的浓度不同，其消毒效果也不一样。大多数消毒剂在高浓度时起杀菌作用，低浓度时则只有抑菌作用。在一定浓度下，消毒剂对某种细菌的作用时间越长，其效果也越强。若温度升高，则化学物质的活化分子增多，分子运动速度增加使化学反应加速，消毒所需要的时间可以缩短。（2）微生物的污染程度微生物污染程度越严重，消毒就越困难，因为微生物

如何谁用SDS裂解法进行质粒抽取实验2014/02/24

上海士锋生物科技有限公司本法[根据Godson和Vapnek(1973)的方法修订而成]的产量要低得多，但却比本章所述的其他方法更温和，是提取大质粒(大于15kb)的方法。试验步骤:1、将500ml细菌沉淀物洗过后重悬于10ml用冰预冷的10%蔗糖、50mmol/LTris.Cl(pH8.0)溶液中，将悬液移至30ml的带盖螺口塑料试管[橡树岭(OakRidge)型]中。2、加入2ml新配制的溶菌酶溶液[10mg/ml，溶于10mmol/LTris.Cl(pH8.0)]。当溶液的pH值小于8.0