士锋生物气相色谱柱的安装操作流程2014/07/15

色谱柱的正确安装才能保证发挥其*的性能和延长使用寿命。正确的安装请参考以下步骤：步骤1、检查气体过滤器、载气、进样垫和衬管等检查气体过滤器和进样垫，保证辅助气和检测器的用气畅通有效。如果以前做过较脏样品或活性较高的化合物，需要将进样口的衬管清洗或更换。步骤2、将螺母和密封垫装在色谱柱上，并将色谱柱两端要小心切平。步骤3、将色谱柱连接于进样口上色谱柱在进样口中插入深度根据所使用的GC仪器不同而定。正确合适的插入能zui大可能地保证试验结果的重现性。通常来说，色谱柱的入口应保持在进样口的中下部，当进

士锋生物液相色谱常见14个问题及其解决方法2014/07/14

一、问：用hplc进行分析时，保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决?关于漂移问题：1.温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定。2.流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。3.柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。关于快速变化问题：1.流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定。2.泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。3.流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。二、问：色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题?

DNS（二硝基水杨酸）比色法还原糖含量测定实验2014/07/11

还原糖的测定实验是生化技术中基础实验，是生化课程中必须掌握的实验操作技术，不明白还原糖的测定原理、测定方法？本文罗列了DNS还原糖含量测定实验原理、步骤、DNS试剂的制备、葡萄糖标准曲线的绘制、样品的测定。一、实验目的、DNS(二硝基水杨酸)比色法还原糖含量测定实验实验目的学习和了解还原糖和总糖测定的基本原理、比色法测定还原糖的操作步骤和分光光度计的使用方法。二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类。单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，例如乳糖和麦

士锋生物端锚聚合酶与端粒2014/07/09

粒是真核细胞染色体末端的一个特殊结构，由一段具有特定重复序列的DNA和端粒结合蛋白组成，是维持染色体结构稳定的重要因素。端粒dna的复制不是由dna聚合酶完成的，而是由端粒酶(omerase)催化合成后添加到染色体的末端。正常细胞随着细胞分裂活动的进行，端粒DNA逐渐缩短，当缩短到一定程度时，染色体结构被破坏，细胞进入衰老期并以死亡而告终。但当细胞发生癌变时，由于端粒酶的重新激活，这种端粒DNA随分裂活动发生渐进性缩短的趋势受到阻遏，使正常细胞转化成具有无限分裂能力的永生化恶性细胞。研究表明，端

公司Taq DNA聚合酶属性介绍2014/07/08

(一)酶活性与热稳定性该酶基因全长2496个碱基，编码832个氨基酸，酶蛋白分子为94KDa.其比活性为200000单位/mg.75～80℃时每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷酸，70℃延伸率大于60个核苷酸/秒，55℃时为24个核苷酸/秒.温度过高(90℃以上)或过低(22℃)都可影响TaqDNA聚合酶的活性，该酶虽然在90℃以上几乎无DNA合成，但确有良好的热稳定性，在PCR循环的高温条件下仍能保持较高的活性.在92.5℃、95℃、97.5℃时，PCR混合物中的TaqDNA聚合酶分别经13

免疫组化问题及解决办法2014/07/07

1、染色过强原因解决办法抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长降低抗体滴度（一般指浓缩性抗体）抗体孵育时间：室温1小时或4℃过孵育温度过高，孵育温度超过37℃一般室温20-28℃DAB显色时间过长或DAB浓度过高显色时间不能超过5-10分钟，以显微镜下观察为准2、非特异性背景染色原因解决办法操作过程中冲洗不充分每步冲洗3×5组织中含过氧化物酶未阻断可再配置新鲜3%H2O2封闭，孵育时间延长组织中含内源性生物素正常非免疫动物血清再封闭血清蛋白封闭不充分延长血清蛋白封闭时间3、染色弱原因解决办法抗体浓度过

如何进行枯草杆菌细胞固定化2014/07/03

一、原理：把细胞悬浮在海藻酸钠溶液中，滴进氯化钙溶液中，形成海藻酸钙凝胶小球。细胞保埋在凝胶的小孔中，制成固定化细胞。二、试剂与材料1、枯草杆菌细胞：将枯草杆菌在培养液中培养，在对数生长期离心(3000r/min，20min)收集细胞。2、海藻酸钠溶液：用蒸馏水配制成1.5%的海藻酸钠，灭菌后备用。3、氯化钙溶液：配制成0.1M，灭菌后备用。注射器、无菌水、固定化细胞培养液三、操作方法1、取枯草杆菌湿细胞2g，悬浮在10ml海藻酸钠溶液中混合均匀。2、用注射器吸取上述悬浮液，逐滴滴入到50ml氯

士锋生物凝胶层析法蛋白质脱盐2014/07/02

一、原理：含盐蛋白质溶液流经凝胶层析柱时，低相对分子量的盐分子因浸入凝胶颗粒的微孔中，所以向下移动的速度较慢；而大分子的蛋白质不能进入凝胶颗粒的微孔，以较快的速度流过凝胶柱，从而使蛋白质与盐分开。二、材料与试剂：葡聚糖凝胶（SephadexG25）、洗脱液（蒸馏水或适宜的缓冲溶液）、含盐的蛋白质溶液、蛋白质检测试剂、无机盐检测试剂（依具体情况而定）三、操作方法1、凝胶的准备：称取葡聚糖5g，加入80ml洗脱液（可用水或适宜的缓冲液），在沸水浴中溶胀30min，用倾泻去悬浮的小颗粒。然后装进内径1

血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳2014/06/27

【实验原理】1.电泳的基本原理带电颗粒在电场中向着与其电性相反方向移动的现象称为电泳。电泳时不同的带电粒子在同一电场中泳动速度不同。带电颗粒(球形分子)在电场中的电泳速度(V)实验二血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳从上式看出，带电颗粒在电场中的移动速度(V)与颗粒带电荷量(Q)以及电场强度(E)成正比，与球形分子的大小(半径为r)及所在介质的粘度(η)成反比。因此,在同一电场、同一介质中进行电泳时，带不同电荷，不同大小的颗粒就可以通过电泳而被分离。在实际操作中，为了不考虑不同电压对电泳速度的影响，我

血清三酰甘油的含量测定2014/06/26

三酰甘油的主要生理功能是储能和供能，主要分布在皮下、腹腔大网膜、肠系膜、内脏周围等脂肪组织中。在血清中，内源性三酰甘油主要以VLDL的形式运输，外源性三酰甘油主要以CM的形式运输。在正常成人空腹血脂中，三酰甘油的含量为0.11～1.69(均值为1.13)。血脂的含量受膳食、种族、性别、年龄、职业、运动状况、生理状态以及激素水平等多因素影响，波动范围较大。例如：青年人血浆胆固醇水平低于老年人，某些疾病时，血脂含量有很大变化，如糖尿病和动脉粥样硬化的患者，血脂一般都明显升高。因此，测定血脂的含量在临

士锋生物电泳技术及其应用2014/06/25

一：电泳（Electrophoresis）：带电粒子在直流电场中向着所带电性相反的电极移动的现象。电泳分析技术：利用电泳现象进行物质分离的技术。二：影响电泳的因素：1．带电粒子的带电状态（电量和电性）。2．带电粒子的分子量大小和分子形状。3．电场强度。4．缓冲液的PH值，组成成分及离子强度。5．支持介质的吸附和电渗作用。三：蛋白质电泳的机理1．蛋白质是两性电解质：当PH=PI时，所带净电荷为零；当PHPI时，所带净电荷为负；当PH距离PI越远时，所带电量越多。2．不同蛋白质等电点不同，在同一缓冲

士锋生物薄层色谱法介绍2014/06/24

薄层色谱具有设备简单、速度快、分离效果好、灵敏度高以及能使用腐蚀性显色剂等优点，是一种微量的分离分析方法。它可以与光谱或质谱结合起来，是一种很有发展前途的分析技术。薄层色谱是把吸附剂或支持物（如氧化铝、硅胶和纤维素粉等）均匀地铺在一块玻璃板上形成薄层，将分离样品滴加在薄层的一端，当流动相沿着含有固定相的支持物上移动时，被分离组分就在固定相与流动相之间进行分配或吸附，经过反复无数次的分配平衡或吸附平衡，zui后按照各个组分的差异而被分离。三、基本操作薄层色谱中，铺薄层的板可用玻璃板，也可用塑料板。

士锋生物琼脂糖凝胶电泳实验技巧2014/06/19

核酸分子是两性解离分子，在高于其等电点的电泳缓冲液中，其碱基不解离，而磷酸基团全部解离，核酸分子因而带负电荷，电泳时向正极迁移。琼脂糖主要从海洋植物琼脂中提取而来并经糖基化修饰，为一种聚合链线性分子，使用琼脂糖凝胶作为电泳支持介质，发挥分子筛功能，使得大小和构象不同的核酸分子的迁移率出现较大差异，从而达到分离的目的。琼脂糖凝胶电泳操作简单、快速，通过调整其使用浓度，使得分辨率达到大多数实验的要求，因此成为分离、鉴定、纯化核酸分子的常用方法。但操作过程中仍有不少要注意的问题。1凝胶制作1．1凝胶浓

士锋生物双向电泳的技术流程和样品制备2014/06/17

基因组学蛋白质组学：可视为分子生物学的大规模筛选技术，目的在于归类细胞中的蛋白质的整体分布，鉴定并分析感兴趣的个别蛋白，zui终阐明它们的关系与功能。上述两种学科的研究内容在互补的水平上研究了细胞的分子架构，又都在各自的水平上提供了增强对方效应的信息，因此二者存在有很强的且带有系统性相互关系。Applicationsofproteomics•Proteinidentification/characterization•Protein-proteininteraction•Post-transla

染色体免疫共沉淀法（ChIP）分析细胞和组织中未固定染色体中组2014/06/09

INTRODUCTIONIncellsａndtissues,thehistoneproteinsthatconstitutethenucleosomescanpresentmultiplepost-translationalmodifications,suchaslysineacetylation,lysineａndargininemethylation,serinephosphorylation,ａndlysineubiquitination.Ontheirown,orincombinatio

士锋生物原位杂交与荧光原位杂交2014/06/04

一、原位杂交(InSituHybridization,ISH)是用标记的核酸探针，使用非放射检测系统或放射自显影系统，在组织切片、细胞涂片及染色体制片上等对核酸进行定性、定位和相对定量研究的一种分子生物学方法，具有灵敏、特异、直观等优点。已逐渐成为分子生物学和分子病理学的常见技术之一，广泛应用于肿瘤生物学、血液病理学、遗传、微生物学、细胞和分子生物学、神经内分泌学、免疫学等领域及治疗评估和预后判断等研究中。菌落原位分子杂交：是指将转化或感染后的菌落印影在滤膜上，用碱裂解，中和后洗净烘干，再用目的

士锋生物比色分析法和分光光度法测定蛋白质含量2014/06/03

1.掌握比色分析法和分光光度法基本原理、标准曲线的制作及使用，标准管法结果计算2.熟悉蛋白质含量测定常用方法、原理及应用3.了解常用可见光、紫外分光光度计的测定原理及使用【教学内容】1.酚试剂法蛋白质含量测定Lambert-Beer定律，比色分析法和分光光度法基本原理,722型分光光度计使用，常用蛋白质含量测定方法及应用，酚试剂法测定蛋白质含量原理、操作,标准曲线的制备及使用2.双缩脲法蛋白质含量测定自学和独立完成实验并与酚试剂法比较，结果计算3.紫外分光光度法蛋白质含量测定紫外分光光度法测定蛋

士锋生物纤维素酶活力的测定2014/05/29

纤维素酶是一种多组分酶，包括C1酶、CX酶和¦Â-葡萄糖苷酶三种主要组分。其中C1酶的作用是将天然纤维素水解成无定形纤维素，CX酶的作用是将无定形纤维素继续水解成纤维寡糖，¦Â-葡萄糖苷酶的作用是将纤维寡糖水解成葡萄糖。纤维素酶水解纤维素产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将碱性条件下的3,5-二硝基水杨酸（DNS）还原，生成棕红色的氨基化合物，在540nm波长处有zui大光吸收，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法测定其还原糖生成的量就可测定纤维素酶的活力。三、实验材料、

如何进行旋光法测定谷氨酸2014/05/26

谷氨酸钠分子结构中含有一个不对称碳原子，具有光学活性，能使偏振光面旋转一定角度，可用旋光仪测定其旋光度。三、试剂与仪器仪器旋光仪(精度±0.01°)备钠光灯(钠光谱D线589.3nm)。试剂盐酸四、操作步骤1.称取于98±1℃干燥5h的样品10g(称准至0.0001g)，加50mL水溶解并移入100mL容量瓶中，加20mL盐酸，混匀，待冷却至室温，补加水至刻度，摇匀。2.在恒温室(20℃)里将上述样液倒入旋光管中，按一般旋光法操作，测定其旋光度，同时记录样液温度。用旋光法测定含量时，比旋光度应在

士锋生物具体层析方法：气相色谱层析2014/05/23

1)载气常用的载气主要有氮、氩、氢和二氧化碳等。这些气体一般都由高压气瓶供给(2)进样器气相色谱仪可以用于分离固相、气相和液相标本。液相标本采用微升注射器穿过橡皮隔片注入，气相标本采用特种气相注射器注入。(3)谱柱及加热炉色谱柱一般由金属或玻璃制成，通常采用的柱长2m~4m，内径2mm，毛细管柱长度可达20m～150m，内径为0.2mm。载体一般采用惰性、多孔的固体颗粒。多由硅藻土或玻璃珠制成，分析不同极性的微生物化合物，为了获得zui适的分离条件，要求有不同固定相的载体。目前比较常用的载体有：