士锋生物双向电泳的技术流程和样品制备

基因组学
蛋白质组学：可视为分子生物学的大规模筛选技术，目的在于归类细胞中的蛋白质的整体分布，鉴定并分析感兴趣的个别蛋白，zui终阐明它们的关系与功能。
上述两种学科的研究内容在互补的水平上研究了细胞的分子架构，又都在各自的水平上提供了增强对方效应的信息，因此二者存在有很强的且带有系统性相互关系。
Applications of proteomics
• Protein identification/characterization 
• Protein-protein interaction 
• Post-translational modifications 
• SubCellular location 
• Elucidation of pathway 
• Target validation and toxicology 
• Drug discovery

蛋白质组分析的首要要求
将来自于全细胞、组织或生物体中所包含的多达几千种混合蛋白质进行分离、检测和分析 。
2-DE技术依然是大多数蛋白质组研究中分离复杂蛋白质混合物的技术 。
双向电泳的技术流程和样品制备

双向电泳的技术流程和样品制备

双向电泳分析中的样品制备
制备原则：
应使所有待分析的蛋白样品全部处于溶解状态（包括多数疏水性蛋白），且制备方法应具有可重现性。
防止样品在聚焦时发生蛋白的聚集和沉淀。
防止在样品制备过程中发生样品的抽提后化学修饰（如酶性或化学性降解等）。
*去除样品中的核酸和某些干扰蛋白。
尽量去除起干扰作用的高丰度或无关蛋白，从而保证待研究蛋白的可检测性。

不同样品的基本处理方法
可溶性样品 
固体组织样品 
细胞
样品的分级处理：
通过采用亚细胞分级、液相电泳和选择性沉淀等方法对蛋白质样品进行分级处理，可降低样品的复杂性并富集低丰度蛋白质。当前zui简单有效的处理是采用分级抽提，按样品溶解度不同进行分离。