如何进行枯草杆菌细胞固定化

一、原理：把细胞悬浮在海藻酸钠溶液中，滴进氯化钙溶液中，形成海藻酸钙凝胶小球。细胞保埋在凝胶的小孔中，制成固定化细胞。

二、试剂与材料

1、枯草杆菌细胞：将枯草杆菌在培养液中培养，在对数生长期离心(3000r/min，20min)收集细胞。

2、海藻酸钠溶液：用蒸馏水配制成1.5%的海藻酸钠，灭菌后备用。

3、氯化钙溶液：配制成0.1M，灭菌后备用。

注射器、无菌水、固定化细胞培养液

三、操作方法

1、取枯草杆菌湿细胞2g，悬浮在10ml海藻酸钠溶液中混合均匀。

2、用注射器吸取上述悬浮液，逐滴滴入到50ml氯化钙溶液中，浸泡30-120min。

3、滤出凝胶珠用无菌水洗涤，除去凝胶珠表面的细胞，得到固定化细胞。

4、将固定化细胞1g，放进25ml培养液中，于37℃振荡培养16-24h。观察细胞生长情况，以及凝胶珠直径和重量的变化。

注意：磷酸盐会破坏凝胶结构。故固定化细胞培养液应限制磷酸盐含量，同时要有一定浓度的钙离子。