细胞信号传导通路*新模型2014/11/28

繁复的细胞信号网络的解析一直是困扰生物学界的一个难题，众多的传导路径往往使研究人员无从入手，给具体实验研究带来极大困扰。而英国格拉斯哥大学研究人员zui近证实，通过贝叶斯统计模型，不仅能对细胞信号通路模型进行评级，选出*的传导路径，还可对细胞信号网络模型进行全新的诠释。这一代表了细胞信号领域突破性进展的研究成果作为封面文章发表在近期出版的《科学—信号传导》杂志上。细胞信号传导通路即是一个典型的多因子、多参数、相互调节的立体空间网络。虽然科学家已经可以在具体实验数据的基础上建立细胞信号传导模型，但

革兰氏染色法（原理、方法和意义）2014/11/27

革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，这种染色法是由一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰（HansChristianGram，1853年－1938年）于1884年所发明，zui初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察阳性紫色阴性红色。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。实验原理通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏

G418筛选稳定表达细胞系2014/11/25

1.G418的配制：取1gG418溶于1ml1M的HEPES液中，加蒸馏水至10ml，过滤消毒，4度保存。2.细胞培养：取待测培养细胞，制备成细胞悬液，按等量接种入多孔培养板中，培养6小时左右开始加药。3.制备筛选培养基：在100ug/ml~1000ug/ml范围内确定几个梯度，比如先做个100ug/ml、400ug/ml、800ug/ml、1000ug/ml，按梯度浓度用培养基稀释G418制成筛选培养基。4.加G418筛选：吸除培养孔中培养基，PBS洗涤一次，每孔中加入不同浓度的筛选培养基。5

小胶质细胞原代培养2014/11/24

混合胶质细胞培养来源于1-2天的大鼠，如同星形胶质细胞培养，有轻微的改动。乳鼠断头后大脑收集在DMEM-Ham‘sF-12含有1%抗菌素的溶液中。除去脑膜，血管和白质后，用机械匀浆法将大脑皮层匀浆，然后将细胞悬液依次通过230μm和104μm孔径的钢网过滤，然后用离心法收集细胞，用小胶质细胞条件培养基重悬细胞。条件培养基的成分：DMEM-Ham’sF-12培养基，添加2mML-谷氨酸，1mM丙酮酸钠，1×非必须氨基酸，10%胎牛血清和0.5%双抗溶液。然后接种到培养皿中。小胶质细胞的分离：混合胶

培养细胞活力测定2014/11/20

培养细胞活力测定是肿瘤体外研究中应用zui广的技术手段之一。任何培养瓶内生长的细胞都由死细胞和活细胞组成，从形态上区别死、活细胞是困难的。方法：四唑盐（MTT）比色法四唑盐（MTT）商品名为噻唑蓝四唑盐比色法的原理：活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物（formazan），并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan（甲月替）量成正比。再用酶标仪测定OD值。MTT法简单快速、准确，广泛应用于新药筛选、

癌细胞的分离培养和接种2014/11/17

、组织块——酒精浸泡——剪碎——Hank's冲洗——胰酶消化——离心——Hank's冲洗——离心——计数——转至培养瓶——37℃培养——接种。2、组织块——酒精浸泡——剪碎——转至培养瓶——加培养液——37℃培养——接种。具体操作步骤：一、材料及试剂：仪器：培养箱(调整至37℃)，培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃)。材料：小鼠c26结肠癌和lewis肺癌组织块。试剂：1640培养基(含20%小牛血清)，0.25%胰酶，Hank'

CHO细胞与酵母细胞比较2014/11/14

CHO细胞表达系统与毕赤酵母表达系统是当前发展前景看好的两个表达系统，为了能够更加直观地对两个表达系统有一定的认识，特意在此篇中对两个表达系统作一定的比较，从而能够更进一步的对两个表达系统有更深的了解一、CHO细胞表达系统1、优点CHO细胞属于成纤维细胞，既可以贴壁生长。也可以悬浮生长。目前常用的CHO细胞包括原始CHO和二氢叶酸还原酶双倍体基因缺失型(DHFR-)突变株CHO。近年来，为降低生产成本和减少血制品带来的潜在危害性，动物细胞生产开始使用无血清培养基(SFM)，但SFM往往导致细胞活

脾细胞和骨髓瘤细胞的融合2014/11/13

1、脾细胞和骨髓瘤细胞一般按2：1-5：1的密度混合，有的报道可以到10：1，不过总体来说我们常选3：1-5：1，记住，原则是脾细胞的数量比骨髓瘤的多。2、融合前，一般用HAT培养基做饲养细胞铺板，这是融合前的准备工作，因为饲养细胞分泌的某些细胞因子有助与融合的杂交瘤细胞生长，并且提供一定的细胞密度。通常是可以融合前一天做饲养细胞，老鼠选ICR或是BALB/C与ICR杂交的鼠，一只老鼠可以铺2-3块96孔板。3、我们融合选用96孔细胞培养板。融合时将脾细胞与骨髓瘤混合后离心，然后用手掌稍稍搓离心

细胞培养的污染及控制2014/11/10

污染的类型细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。一、细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能因为操作不慎而引起污染。zui常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。所以，每天应仔细观察

染色体制片程序2014/11/07

1、取对数生长期细胞一个T75或T25瓶。2、将培养基换成10mlDMEM(H)+10%FBS+0.1ug/ml秋水仙素的培养基，处理1~2小时。3、将细胞培养液倒掉，马上加入3~4ml0.1%胰蛋白酶，并立即摇晃0.5~1min。当在显微镜下看到分裂相细胞脱壁后，马上加入终止液终止消化，并将分裂相细胞收集在一个15ml的离心管中，并在1200r/min离心4min。4、将上清液倒掉，剩余50ul左右的液在管中，并轻微震动，使细胞沉淀重新悬浮。5、加入10ml的低渗液（0.075MKCL），*毫

基底动脉平滑肌细胞原代培养2014/11/03

培养液：MEM(GIBCO)，20％FBS，双抗100IU／ml；原代细胞培养：取5kg左右兔空气栓塞法处死后断头，于无菌条件下从枕大孔处用大止血箝扳开颅骨暴露并小心取出脑组织放入装有DMEM的培养皿中，用眼科镊分离基底动脉后按常规平滑肌方法贴块培养。传代：（1）吸除培养瓶内旧培养液。（2）D-Hanks液冲洗2遍。（3）加入消化液少许，以能覆盖瓶底为限。（4）倒置显微镜观察发现细胞胞质回缩、细胞间隙增大时，立即终止消化。（5）吸除消化液，向瓶底注入D-Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残留

有关培养基的PH值问题2014/10/27

：配培养基的时候调PH为7.25，分装-20度保存，几天后解冻再测为7.80，怎么回事啊，难不成每次配时得调到7以下吗？解冻后重新调PH值，再过滤分装，还能用吗？还能－20度保存吗？答：看来你用的是粉末DMEM，说明书上说应该加3.7g碳酸氢钠，还说过滤的时候PH值升高0.1-0.2.但是3.7g碳酸氢钠对应的是10%的CO2培养环境，如果你用的是5%的CO2，那么你只要加入1.85g碳酸氢钠就行，我试过，这时候基本不用调节PH值，然后开始过滤，过滤的时候PH会上升，但基本上也是在要求的范围。但

细胞培养FAQ2014/10/24

1、冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37°C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。2、细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。3、可否

细胞培养污染的途径、危害及预防措施2014/10/22

污染是细胞培养技术中面临的主要问题。某些污染的发生往往难以察觉检测，而且污染源能长期共存于培养体系中，这类染事实上大部分被人们忽视了。培养的细胞作为个生物体，会对培养环境以及环境中的污染物作相应的反应，造成培养细胞生物学特性的改变，而实验结果造成潜在的威胁，而且随着污染时间的长而增加。培养环境中的物理、化学及生物因素都可能入培养环境造成污染。由于入侵的微生物在培养系中不断增殖、代谢，因此生物性的污染对细胞的害zui大。随着污染微生物的不断增殖，交叉污染可能性也不断增加。此外，微生物代谢消耗大量需

足细胞的来源及培养方法2014/10/20

大鼠原代足细胞：丁香园网友gaoxueyan99的观点为：培养方法：过筛：100目，150目，200目，收集200目内为小球1、选取100克左右大鼠，无菌取肾，去包膜，分离皮质，剪刀切成小块！2、100目上注射器芯研磨，DMEM培养液冲洗100目网筛多遍，DMEM冲洗200目内组织！3、离心管收集，1000转离心5分钟！4、*培养基重悬沉淀，接种于培养瓶或皿！一只大鼠一皿或一瓶！5、5％CO2，37度培养箱zui内测放置.6、培养五天细胞换液，七天左右细胞传代！

细胞损伤模型2014/10/16

体外肝细胞损伤模型建立（CCl4和H2O2）1、大鼠肝细胞的分离和培养大鼠4％戊巴比妥麻醉，门静脉插管，先以无钙灌流液灌流，继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15min。将肝脏移至一平皿内，轻轻撕去肝包膜后，加入含5％小牛血清的清洗液，用吸管吹打成单个肝细胞悬液，200目尼龙网过滤，低速离心（500r·min-1，1min，4℃）弃上清，同法用清洗液反复洗3次。然后用*1640培养液（内含10％小牛血清，105U·L-1青霉素，100mg·L-1链霉素和10mg·L-1胰岛素）制成

单核细胞的分离2014/10/15

基本原理：本文分离单核细胞所用方法是Percoll非连续性密度梯度离心法，主要是根据不同细胞间密度的差别进行细胞分离。此法易操作，且使用通常的实验设备即可完成。试剂与器材·外周血单个核细胞·PBS1×和PBS10×（无Ca2+、Mg2+），含0.5mMEDTA·胎牛血清（56℃，30分钟加热灭活）·HCl1mol/l·Percoll分层液（密度=1.130g/ml,商品）·4g/L台盼蓝染液（溶解在PBS液中）·50ml聚丙烯圆锥管·毛细吸管·移液管（1、2、10ml）·CO2孵箱·超净台·有旋

跨膜运输技术讲解2014/10/10

估计细胞膜上与物质转运有关的蛋白占核基因编码蛋白的15~30%，细胞用在物质转运方面的能量达细胞总消耗能量的2/3。细胞膜上存在两类主要的转运蛋白，即：载体蛋白（carrierprotein）和通道蛋白（channelprotein）。载体蛋白又称做载体（carrier）、通透酶（permease）和转运器（transporter），有的需要能量驱动，如：各类APT驱动的离子泵；有的则不需要能量，如：缬氨酶素。通道蛋白能形成亲水的通道，允许特定的溶质通过，所有通道蛋白均以自由扩散的方式运输溶质。

肿瘤细胞培养2014/10/09

肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是zui多的。另外肿瘤对人类是威胁zui大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。一、组织培养肿瘤细胞生物学特性肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿瘤细胞和在体外培养的肿瘤细胞，其差异较小，但也并非*相同。培养中的肿瘤细胞具以下突出特点：（－）形

成纤维细胞的培养和形态2014/10/08

成纤维细胞培养（一）原代培养1、在手术室无菌条件下，切取新鲜的皮肤，增殖性瘢痕和瘢痕疙瘩组织，修除表皮和皮下组织，盐水反复冲洗后放入含PS的DMEM培养液内带回无菌工作间。2、把组织块置于培养皿内，Hank,s液漂洗三遍后吸净Hank,s液，眼科剪反复剪切组织块成0.5－1mm3大小。用弯头吸管吸取组织块接种于40ml培养方瓶瓶壁上，组织块间留约0.3－0.5cm的间距。3、塞好瓶塞，放入37℃电热恒温培养箱内3.5小时使培养的组织小块微干涸。4、从温箱中取出培养瓶，向瓶底轻轻注入含20%CS及