基底动脉平滑肌细胞原代培养

培养液：MEM(GIBCO)，20％FBS，双抗100IU／ml；

原代细胞培养：取5kg左右兔空气栓塞法处死后断头，于无菌条件下从枕大孔处用大止血箝扳开颅骨暴露并小心取出脑组织放入装有DMEM的培养皿中，用眼科镊分离基底动脉后按常规平滑肌方法贴块培养。

传代：

（1）吸除培养瓶内旧培养液。

（2）D-Hanks液冲洗2遍。

（3）加入消化液少许，以能覆盖瓶底为限。

（4）倒置显微镜观察发现细胞胞质回缩、细胞间隙增大时，立即终止消化。

（5）吸除消化液，向瓶底注入D-Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉。

（6）用吸管吸取培养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液；传代将原代细胞按1：1传代，此后按1：3进行传代。

（7）传代后细胞放置在37℃，5%CO2孵育箱内培养。

我在做细胞培养时的一些小经验：

（1）在超净台操作（废液杠放入）前要用紫外灯照30MIN以上，75%酒精擦手

（2）贴块法要细胞贴壁好一定剪的够碎（先把血管剪成小段再狂剪一顿），铺开时要平均的展开，聚在一起翻面时容易冲掉。

（3）做原代的时候从取材直到放进孵箱都要严格无菌操作，该换的管子还是换了，别省了根管子坏了一瓶细胞

（4）原代培养FBS含量高些，原代很娇贵的