成纤维细胞的培养和形态

成纤维细胞培养

（一）  原代培养

1、在手术室无菌条件下，切取新鲜的皮肤，增殖性瘢痕和瘢痕疙瘩组织，修除表皮和皮下组织，盐水反复冲洗后放入含PS的DMEM培养液内带回无菌工作间。

2、把组织块置于培养皿内，Hank,s液漂洗三遍后吸净Hank,s液，眼科剪反复剪切组织块成0.5－1mm3大小。用弯头吸管吸取组织块接种于40ml培养方瓶瓶壁上，组织块间留约0.3－0.5cm的间距。

3、 塞好瓶塞，放入37℃电热恒温培养箱内3.5小时使培养的组织小块微干涸。

4、从温箱中取出培养瓶，向瓶底轻轻注入含20%CS及PS的DMEM培养液5ml，然后缓缓翻转培养瓶，让培养液慢慢覆盖附于瓶壁上的组织小块，置于37℃温箱内培养。

5、一周后取出培养瓶，弃去瓶内培养液，Hank,s液漂洗两次后加相同的培养液5ml继续培养。以后待细胞萌出后，同样方法每周换液两次。

（二）传代培养

待原代培养细胞生长基本融合成片时即可传代。

1、吸出培养瓶内的培养液，Hank,s液漂洗两次，向瓶内加入0.5%的胰蛋白酶溶液少许以覆盖瓶底为度。

2、大约1分钟左右，镜下观察细胞胞质回缩，细胞间隙增大时立即吸出胰蛋白酶液，加入DMEM培养液终止消化。

3、用吸管吸取培养液轻轻反复吹打瓶壁细胞使之脱落形成细胞悬液，按1：3比例分装传代，加入足量的DMEM培养液后置于37℃恒温培养箱内培养。

4、每周换液两次，待细胞融合成单层再次传代。本实验均在第4－8代进行。