细胞实验技术及基本知识（三）2014/09/25

器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g：浓硫酸200ml：蒸馏水1000ml）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，zui后蒸馏水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。6.高压消

无血清技术及其培养基2014/09/23

经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免病毒污染造成的危害。无血清培养基(serumfreemedium,SFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所配制的*培养基可以满足大部分细胞培养的要求，但对有些实验却不适合，如观察一种生长因子对某种细胞的作用，这时需要排除其他生长因子的干扰作用。而血清中可能含

无菌操作注意事项2014/09/22

体外培养细胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。即便使用设备完善的实验室。若实验者粗心大意，技术操作不规范,也会导致污染。因而．为在一切操作中为zui大可能的保证无菌。每一项工作都必须做到有条不紊和*靠。【培养前准备】在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。根据实验要求，准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。这可以避免开始实验后，因物品不全往返拿取而增加污染机会。【操作野消毒】无菌培养室每天都要用0

细胞分化与肿瘤2014/09/18

肿瘤是细胞在各种致瘤因素的作用下，基因发生改变，失去对其生长的正常调控，导致细胞异常增生。恶性肿瘤又称为癌症（cancer），是目前危害人类健康zui严重的一类疾病。我国城市地区居民死因*位为恶性肿瘤。肿瘤细胞在很多生物学特性上不同于正常细胞，也有别于修复性增生的细胞，具有明显的去分化现象。一、肿瘤细胞的分化特征恶性肿瘤细胞的特征之一是分化程度低，表现为形态上的幼稚性，功能上的异常，细胞的多种表型（phenotype）又回到原始的胚胎细胞表型，即发生细胞的去分化现象。机体在致癌物质的作用下，干细

实验室细胞培养注意事项2014/09/15

1.实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminarflow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。2.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时

蝗虫减数分裂过程观察2014/09/11

一实验目的1.通过实验了解高等动物精子形成中的减数分裂过程，观察其染色体的动态变化；2.学习并掌握制备蝗虫减数分裂玻片标本的方法。二实验原理在高等生物的雌雄性细胞形成的过程中，由有性组织(如花药和胚珠、精巢和卵巢)中的某些细胞分化为孢母细胞(2n)，以及精母与卵母细胞(2n)。进一步由这些细胞进行减数分裂，zui终各自产生4个小孢子或精细胞，或是分别产生一个大孢子或卵细胞与三个退化的极体(1n)。在减数分裂过程中，可以辨认染色体形态和数量上的动态变化，从而为遗传学研究中远缘杂种的分析、染色体工程

如何进行BrdU标记法2014/09/09

1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。4．甲醇/醋酸固定10min。5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。6．5％正常兔血清封闭。7．甲酰胺100℃，5min变性核酸。8．冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓

传代培养细胞染色体显示法2014/09/01

1．培养细胞：取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80％～90％汇合单层培养细胞。2．加秋水仙素：使用zui终浓度为0.02～0.8微克/毫升营养液，温箱继续培养6～10小时；或用低温封闭法：把培养细胞置于4℃条件下6～12小时后，再于37℃温箱继续培养6～10小时处理（加秋水仙素）。3．采集分裂细胞：可利用分裂中期细胞体变圆与底物附着不牢特点，此时手持培养瓶，左右反复横向水平摇动，令培养液在培养细胞表面反复冲刷。应用此法可使90％的中期分裂细胞从瓶壁脱落，注意勿用力过猛，以防多量非分裂细胞脱落

士锋生物人类外周血染色体制备2014/08/27

一、原理人外周血小淋巴细胞，通常都处在G1期（或G0期），一般情况下不进行分裂。如在培养液中加入植物血凝素（PHA），这种小淋巴细胞受到刺激可转化为淋巴母细胞，进入有丝分裂。短期培养后，经秋水仙素处理，低渗和固定，即可得到大量的有丝分裂细胞。人体的1ml外周血内一般含有约1×106～3×106个小淋巴细胞，足够染色体标本制备和分析之用。二、用品和试剂1．5ml注射器（7号针尖），培养瓶、刻度吸管，需15磅灭菌20分钟。离心管、吸管、量筒、载玻片，经洗液按常规清洗、烘干备用。2．超净工作台，恒温培

骨髓细胞染色体标本制备2014/08/25

一、原理骨髓染色体标本制备通常用于白血病患者，特别是慢性或急性粒细胞性白血病，因为骨髓反映粒系统细胞增生情况，这些病人不宜用外周血。即使是淋巴细胞性白血病，也不主张用外周血，因为加PHA刺激外周血培养，只能获得正常淋巴细胞分裂相，并不能反映那些病理淋巴细胞的染色体改变。骨髓细胞属不断增殖的细胞，培养可分短期培养和直接制片法，无论哪种其培养液中均不需加PHA。二、用品和试剂同外周血染色体制备。三、操作步骤（一）短期培养法1．取材、培养：从髂骨取骨髓液0.2—0.5ml，无菌注入装有5ml培养液的培

细胞器的光镜切片和电镜照片观察实验2014/08/19

一、三种细胞器的光镜切片（一）高尔基复合体(GolgiComplex)用镀银法染色的豚鼠脊神经节光镜切片:神经细胞因合成运输大量的蛋白质而含有发达的内质网和高尔基复合体，在低倍镜下观察，神经节的假单极细胞体被神经束分隔成群。神经细胞的胞体呈圆形或椭圆形。转换高倍镜观察，细胞中央不着色的圆形区为细胞核。在核的周围有黑褐色颗粒状或呈不规则的条索状结构即为高尔基复合体。细胞器的光镜切片和电镜照片观察实验图5一l神经节细胞(示高尔基复合体)(二)尼氏小体(Nissl’sBody)甲苯胺兰染色的牛脊髓涂片

如何进行细胞电融合实验2014/08/14

目的要求使学生在了解电融合原理的基础上，学会掌握各种细胞悬液的制备及电融合过程的操作方法。实验原理游离的动物细胞或原生质体，置于电融合室中，在高频交流电场的作用下，细胞被极化，成为偶极子，造成细胞之间相互连接，如果施加的高频交流电压（既正弦波的P-P值）过高或作用时间过长，则细胞连接成串珠状，应适当控制以上条件，尽量是两细胞处于点接触状态；然后施加方波脉冲予以刺激，由于电脉冲的瞬间作用，可击破两细胞接触点部位的质膜，此时质膜脂类分子发生重组，同时由于细胞表面的张力作用，使两细胞融合逐步完成。实验

士锋生物细胞凝集反应实验2014/08/13

细胞质膜是由蛋白质不同程度镶嵌在脂双层中所形成的动态流动结构，蛋白质和脂类分子又与寡糖链结合为糖蛋白和糖脂分子，糖蛋白和糖脂分子伸至细胞表面的分枝状寡糖链在质膜表面形成细胞外被（又称为糖萼）。许多研究结果表明：细胞间的分子识别、细胞的生长和分化、免疫反应和肿瘤发生等均与细胞外被（分枝状寡糖链）有关。凝集素能与细胞外被的糖分子相连接、在细胞间形成“桥”，从而达到细胞凝集的效果。1．实验目的1．1观察血细胞的凝集现象；1．2掌握凝集素促使细胞凝集的原理。2．实验原理凝集素（1ectin）是一类含糖的

动物细胞培养技术平台2014/08/12

动物细胞大规模培养已成为生物制药领域zui重要的关键技术之一，并以其研究的深入和进展推动生物技术产业的迅速发展。专家预言：蛋白治疗药物如糖蛋白、抗体和多肽药物仅仅只是刚刚开始进入市场，预计在下一个10年或20年会有更为快速的发展。届时，蛋白治疗药物的迅速增长和市场需求将远远超过*的生产能力。动物细胞规模化生产重组蛋白和抗体的工艺选择可考虑使用当前较成熟的工业化支持技术平台，以缩短产品工艺研发的时间，加快工业化进程。当前已获FDA批准的生物技术产品以及公开发表的生产工艺中，占有主流优势的是搅拌式生

士锋生物染色体分带技术2014/08/07

染色体显带技术是在显示染色体基础上发展起来的技术，其优点是能显现染色体本身更细微的结构，有助于更准确地识别每条染色体及染色体异常疾病。染色体分带技术能适用于各种细胞染色体标本。染色体显带是沿着整条染色体的长轴，能显现出着色深浅不同、横向走的带型。目前认为染色体显带现象是染色体结构所致。但用特殊方法处理后，再用染料染色，则带型更加清晰，随显带方法不同，显现出的带型的特点也不一样，这说明带的出现与染料的特异结合相关。人类染色体能显现出近2000个G带，这些带再融合成一般显微镜下可见的850条左右的高

士锋生物细胞原代培养2014/08/06

一、原理将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。二、仪器、材料及试剂仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）材料：胎鼠或新生鼠试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank’s液，碘酒三、操作步骤（一）胰酶消化法1、器材：将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致

士锋生物免疫荧光样品制备与观察2014/08/04

一、原理（一）什么是荧光，简单地讲，当用一定波长的光（如紫外光）照射某种物质时，经过照射的物质在极短时间内即可发射出一种可见的光，这种光即为荧光。在生物中，由于产生荧光的方式不同，可以概括地归纳为以下几种：1．自发荧光：在生物的某些组织中，经紫外线照射后能直接发射出荧光的称为自发荧光（或直接荧光）。如植物组织中的叶绿素，经紫外线照射后，即可发出红色荧光。2．次生荧光：有些生物组织经紫外线照射后，并不能发出荧光，但是当它吸收荧光染料后也可以产生荧光，这种称为次生荧光（或间接荧光）。如吖啶橙，DAP

PCR产物的克隆技术2014/07/23

在许多研究中,需要将PCR产物克隆,以获得目的dna片段。此时,所用PCR循环数应尽量小,以减少平台效应或非特异性扩增产物的干扰。通常将PCR产物插入到载体中有下列一些方法。1.平末端连接：由于Taqdna聚合酶往往在PCR产物3'端加上多余的非模板依赖碱基,在用平末端连接克隆PCR产物前,可用Klenow片段或T4DNA聚合酶处理补平末端。2.在PCR产物尾部加dT或ddT：TaqDNA聚合酶会在3'端加上多余的非模板依赖碱基,而且对A优先聚合,所以PCR产物末端的多余碱基大部分都是A.。利用

纯水和超纯水的区别及纯水仪的工作原理2014/07/21

纯水和超纯水是分子和细胞实验中常用的实验试剂，不同的实验需要的水的级别是不一样的，常常遇见刚进实验室的同学常有个疑问：纯水和超纯水是一样的么？下文主要讲述了纯水和超纯水区别以及纯水仪和超纯水仪的工作原理。纯水和超纯水区别在正确选择实验室超纯水机之前，我们必须很好地了解如下几个概念：什么是纯水?什么是超纯水?二者有何区别?纯水又称纯净水，是指以符合生活饮用水卫生标准的水为原水，通过电渗析器法、离子交换器法、反渗透法、蒸馏法及其他适当的加工方法，制得的密封于容器内，且不含任何添加物，无色透明，可直接

PCR-酶联免疫法检测端粒酶活性攻略2014/07/17

1994年，Kim发明的TRAP由于具有灵敏度高等优点曾被广泛应用于端粒酶的活性检测中，不过安全性不够，现在的端粒酶活性检测实验都在其基础上进行了改良，更显和人性化。以下是具体的实验方法：端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构，端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列，这一序列在生物进化中有高度的保守性(人重复序列为TTAGGG)。已确认端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害的结合(如染色体末端融合、重排、染色体移位和染色体缺失)中起重要作用。由于dna聚合酶不能复制线性DNA