如何进行细胞电融合实验

目的要求 
使学生在了解电融合原理的基础上，学会掌握各种细胞悬液的制备及电融合过程的操作方法。 

实验原理 
游离的动物细胞或原生质体，置于电融合室中，在高频交流电场的作用下，细胞被极化，成为偶极子，造成细胞之间相互连接，如果施加的高频交流电压（既正弦波的P-P值）过高或作用时间过长，则细胞连接成串珠状，应适当控制以上条件，尽量是两细胞处于点接触状态；然后施加方波脉冲予以刺激，由于电脉冲的瞬间作用，可击破两细胞接触点部位的质膜，此时质膜脂类分子发生重组，同时由于细胞表面的张力作用，使两细胞融合逐步完成。 

实验用品 
器材：JCF-1型细胞电融合仪、细胞融合池、普通离心机、倒置显微镜（或研究用显微镜）刻度离心管、刻度吸管、小烧杯（10ml）等。 
试剂：甘露醇、蔗糖、氯化钠等。 
材料：鸡血。 

实验方法 
一、动物细胞的制备 
用灭菌的注射器先吸入Alsver液(葡萄糖2.05g，枸橼酸钠0.8g，NaCl 0.42g，加重蒸水100ml) 1ml，再从鸡的翼下静脉取血0.5～1ml，取出后放入刻度离心管中，再加入2~3ml Alsver液，使总量为4~5ml，混匀并封口，置于4℃冰箱内可供一周内使用。 
二、细胞电融合 
(1) 连接电源线插头至电源线插座。 
(2) 插入融合小室电极至电源线插座，将含有一定密度的动物细胞融合液加入融合小室内，将融合小室板放置倒置显微镜下，调正光距至细胞清晰。 
(3) 按下电源开关。 
(4) 用粗、中、细调调节成串脉冲所需频率300~400KHz，然后调节所需成串脉冲电压30~40V。 
(5) 调节融合脉冲脉宽，调节融合脉冲所需个数，选择好闸门时间(一般为“中”) 
(6) 调节融合脉冲电压至120~300V。 
(7) 同时按下成串脉冲及融合脉冲开关，此时在倒置显微镜中可观察到细胞移动并排列成串状。 
按下脉冲触发开关，可观察到细胞被电脉冲击穿，并与相邻的细胞发生融合。此时实验完成。取下融合小室，关闭电源。