士锋生物肝糖原的提取及鉴定2014/05/22

糖原属于高分子糖类化合物，是动物体内糖的主要储存形式，在肝脏内储量较为丰富。糖原在体内的合成与分解代谢，对血糖浓度的调节起着重要的作用。糖原微溶于水，无还原性，与碘作用生成红色。常用的提取肝糖原的方法是将新鲜的肝组织与石英砂共同研磨以破坏肝组织，加入三氯醋酸溶液沉淀其中的蛋白质，离心除去沉淀。上清液中的肝糖原则通过加入乙醇沉淀而得。将沉淀的糖原溶于水，取一部分加入碘观察颜色反应，另一部分经酸水解成葡萄糖后，用斑氏试剂(Benedict)检验。三、仪器、原料和试剂仪器研钵、离心机、离心管、电炉、广

士锋生物固定化酵母细胞及蔗糖酶的检测2014/05/20

固相酶又称为固定化酶，是通过物理及化学的处理方法，使水溶性酶和固态的水不溶性支持物(或载体)相结合而制备的。通过酶的固定化可以将酶转变成不溶物同时仍保留酶的活力，在催化反应中具有诸多水溶性酶所不具备的优点。常用的酶的固定化方法主要有：1.物理吸附法；2.载体偶联法(键结合法)；3.交联法；4.包埋法；就其应用技术而言，又分为固定化酶和固定化细胞二种。相对于水溶性酶，固定化酶的优点主要是机械强度增加，稳定性提高，可回收反复使用。三、仪器和试剂仪器试管、1毫升吸管4支、水浴锅。试剂1.海藻酸钠若干克

如何检测血浆高密度脂蛋白2014/05/16

高密度脂蛋白（highdensitylipoprotein,HDL）是血浆脂蛋白的一种。zui初由肝脏和小肠合成，新分泌至血液中时呈圆盘状，为新生HDL。在循环中或组织间液中经卵磷脂：胆固醇脂酰基转移酶（LCAT）的催化下，与细胞膜及其它脂蛋白相互作用，使新生HDL颗粒表面的胆固醇接受磷脂的脂酰基而生成胆固醇酯。此非极性的胆固醇酯部分进入疏水的核心，使盘状的HDL逐渐转变成球形的成熟的HDL。HDL不仅能与其它脂蛋白相互作用接受其组成成分，而且还能将组织细胞的胆固醇运输到肝脏而代谢。HDL是有蛋

士锋生物凝胶层析法脱盐和分离蛋白质2014/05/15

（一）原理凡盐析所获得的粗制蛋白质（盐析得到的IgG）中均含有硫酸铵等盐类，这类将影响以后的纯化，所以纯化前均应除去，此过程称为“脱盐”（desalthing）。脱盐常用透析法和凝胶过滤法，这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小，但所需时间较长，且盐不易除尽；凝胶过滤法则能将盐除尽，所需时间也短，但其凝胶过滤后样品体积较大。所以，要根据具体情况选择使用。前实验中样品体积较小，凝胶达滤后样品体积不会太增加，所以选用凝胶过滤法。（二）试剂与器材（1）SephadexG-25。（2）0.

士锋生物葡聚糖凝胶层析脱盐2014/05/14

凝胶层析又称凝胶过滤或排阻层析。凝胶过滤的主要装置是填充有层析介质的层析柱。1.层析介质的特点（1）遇水为不溶解的固相；（2）是化学惰性物质；（3）离子基团含量少；（4）颗粒大小和网眼均匀；（5）机械强度较强；（6）具有可选择的多种孔径。目前使用较多的是葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶及其衍生物。尤其葡聚糖凝胶（商品名称Sephadex）是zui常用的层析介质。它是由一定平均分子量的葡聚糖和交联剂1-氯-2,3-环氧丙烷（葡聚糖凝胶层析脱盐）交联成的具有三维结构不溶于水的高分子化合物。调节

士锋生物淀粉酶的活力测定及专一性实验2014/05/12

酶与一般催化剂zui主要的区别之一是它具有高度的专一性。所谓专一性指的是一种酶只能对一种化合物或一类化合物（通常在这些化合物的结构中具有相同的化学键）起一定的催化作用，而不能对别的物质发生催化反应。例如，淀粉酶只作用于淀粉中的a-1,4葡萄糖苷键，而不能作用于蔗糖分子中a-D-吡喃葡萄糖的C1和b-D-呋喃果糖的C2之间的糖苷键。蔗糖无还原性，淀粉的还原性也极小，它们对3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）呈阴性反应，而唾液淀粉酶（主要含a-淀粉酶）水解淀粉后的产物则为还原性糖，与DNS试剂共热

士锋生物电泳、转膜2014/05/07

转膜是把DNA从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物（一般是尼龙膜）上固定，是进行各种后续研究（如RFLP分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究）的前提。实验目的：掌握SouthernBlotting的原理及操作步骤实验原理：1.转膜的方式：向上的毛细管转移向下的毛细管转移同时向两张膜转移电转移真空转移2.固相支持物的种类及选择：硝酸纤维素膜：非共价结合，易脆，易丢失DNA，尼龙膜（带正电荷的）高强度，不易破损，具有较大的DNA结合容量，它能够吸附变性DNA，核酸以共价结合方式不可逆的结合在尼

士锋生物天然产物中多糖的分离、纯化与鉴定2014/05/05

多糖类物质是除蛋白质和核酸之外的又一类重要的生物大分子。早在60年代，人们就发现多糖复杂的生物活性和功能。它可以调节免疫功能，促进蛋白质和核酸的生物合成，调节细胞的生长，提高生物体的免疫力，具有抗肿瘤、抗疡和抗爱滋病(AIDS)等功效。由于高等真菌多糖主要是细胞壁多糖，多糖组分主要存在于其形成的小纤维网状结构交织的基质中，利用多糖溶于水而不溶于醇等有机溶剂的特点，通常采用热水浸提后用酒精沉淀的方法，对多糖进行提取。影响多糖提取率的因素很多，如：浸提温度、时间、加水量以及脱除杂质的方法等都会影响多

士锋生物黄酮的分离与测定2014/05/04

黄酮类化合物是植物的重要次生代谢产物，也是一些保健品和中药材的有效成分之一。黄酮类化合物的定量方法常用的有hplc法和分光光度法，在实际生产和科研过程中，对于黄酮单体的定量常采用HPLC法，而对总黄酮的测定，考虑到方法的简便、快捷以及可行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的分光光度法。在碱性条件下黄酮类化合物与铝盐形成络合物、在500nm波长处有zui大吸收峰。标准品选用芦丁。试剂和器材一、试剂芦丁标准品。5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH；70％乙醇。二、材料新鲜银杏叶。三、器

士锋生物生物大分子的基本制备技术2014/04/28

生物大分子的制备过程包括选材、细胞破碎和细胞器分离、生物大分子提取纯化、以及样品浓缩干燥和储存等。生物大分子的制备是一项十分细致的工作，既要设法得到它们的纯品，又要努力保持其生物活性。有时制备一个纯度较高的蛋白质、酶或核酸，需要付出较长时间的艰苦劳动。生物大分子制备方法的选择是以生物大分子的理化性质为依据的（表1-1）。对于理化性质不同的生物大分子，所选用的分离提纯方法也不相同。表1-1生物大分子的理化性质与分离纯化方法的选择在生物大分子的制备过程中，为随时了解所用方法和条件的效果，以及提取物质

聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点2014/04/25

等电点聚焦（isoelectricfocusing,IEF）或简称电聚焦（electrofocusing），也曾称等电点分离聚焦电泳等。它是60年代中期出现的技术，克服了一般电泳易扩散的缺点。近年来，等电点聚焦电泳又有了新的进展，可以分辨等电点只差0.001pH单位的生物分子。由于它的分辨力高、重复性好、样品容量大、操作简便、迅速，在生物化学、分类学、分子生物学及临床医学研究等诸方面，都得到广泛应用。等电点聚焦电泳产生pH梯度的方法有两种：一是用两种不同的pH缓冲液相互扩散，在混合区形成pH梯度

士锋生物核酸的定量测定:定磷法2014/04/24

一、目的：掌握定磷法测定核酸的含量。二、原理：在酸性环境中，定磷试剂中的钼酸铵以钼酸形式与样品中的磷酸反应生成磷钼酸，当有还原剂存在时磷钼酸立即转变蓝色的还原产物——钼蓝核酸的定量测定:定磷法钼蓝zui大的光吸收在650—660nm波长处。当使用抗坏血酸为还原剂时，测定的zui适范围为1—10微克无机磷。测定样品核酸总磷量，需先将它用硫酸或过氯酸消化成无机磷再行测定。总磷量减去未消化样品中测得的无机磷量，即得核酸含磷量，由此可以计算出核酸含量。三、器材及试剂：1．器材：①分析天平。②容量瓶（50

士锋生物细胞的原位杂交技术2014/04/23

原位杂交(ISH)是一种可在细胞涂片、组织切片以及分裂中期染色体带中检测DNA或RNA的技术，此方法原理是由DNA或RNA的序列与互补的标记单链DNA/RNA探针结合形成标记的双链杂交分子，本技术可对组织细胞原位的待测核酸分子进行定性，定量及定位分析。在细胞分化调节、基因定位、肿瘤遗传学、分子病理学、病毒学等领域得到广泛应用。经典的原位杂交技术包括载玻片处理，组织细胞的固定，探针的制备或选购，原位杂交，洗涤以及检测，其中探针制备技术不属于本章专业技术，故不作具体评叙，略交待制备使用原则。本章节主

士锋生物葡聚糖凝胶层析实验介绍2014/04/21

凝胶层析又称分子排阻层析或凝胶过滤，是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析分离技术，这一技术为纯化蛋白质等生物大分子提供了一种非常温和的分离方法。层析的固定相载体是凝胶颗粒，目前应用较广的是：具有各种孔径范围的葡聚糖凝胶（Sephadex）和琼脂糖凝胶（Sepharose）。葡聚糖凝胶是由直链的葡聚糖分子和交联剂3—氯1，2—环氧丙烷交联而成的具有多孔网状结构的高分子化合物。凝胶颗粒中网孔的大小可通过调节葡聚糖和交联剂的比例来控制，交联度越大，网孔结构越紧密；交联度越小，网孔结构就越疏松，网

士锋生物液相色谱仪常规分析操作步骤2014/04/17

液相色谱仪操作步骤：1)过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。2)对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3)打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4)进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。5)有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。6)调节流量，初次使用新的流动相，可

士锋生物免疫电泳实验介绍2014/04/15

免疫电泳（immunoelectrophoresis）是将电泳和琼脂扩散结合起来，用于分析抗原组成的一种定型方法，具有灵敏快速的优点。该实验可分为如下两个步骤（图6-1）：1.电泳将待检的可溶性物质在琼脂板上进行电泳分离。由于各种可溶性蛋白分子的大小、质量与所带电荷不同，在电场的作用下，其带电分子的运动速度具有一定的规律，因此通过电泳能够把混合物中的各种不同成分分离开。2.琼脂扩散电泳后在琼脂槽中加入相应抗血清，然后置湿盒内进行双扩散。当抗原与抗体相遇且比例适合时，可形成不溶性复合物，出现特异性

士锋生物植物过氧化物酶同工酶测定2014/04/14

凡能催化同一种化学反应，但其分子结构和带电性质不同的一组酶称同工酶（isoenzyme）。同工酶谱的差异是基因表达的差异造成的，所以在研究植物基因调控与生长发育及其与环境条件的关系以及许多生理生化和遗传问题时，常常要分析同工酶谱的差异。因此，同工酶研究在理论和实践中都有非常重要的意义。一、原理聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化剂作用下聚合而成，具有三维网状结构，其网孔大小可由凝胶浓度和交联度加以调节。凝胶电泳兼有电荷效应和分子筛效应。被分离物质由于所载电荷数量、分子大小和形状的

士锋生物丙烯酰胺凝胶电泳实验2014/04/10

聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离。聚丙烯酰胺凝胶有以下优点：①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N"甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因而电渗作用比较小，不易和样品相互作用。②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成不同程度交链结构，其空隙度可在一个较广的范围内变化，可以根据要分离物质分子的大小，选择合适的凝胶成分，

牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化2014/04/09

实验目的：掌握培养基的配制原则与方法；掌握划线分离纯化微生物的原理与方法熟悉手提式高压灭菌器的使用方法和注意事项；实验材料：器材：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等实验原理：培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素、能源和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基要选择合适的配比关系；选择合适的理化性质；配后要及时灭菌。牛肉膏蛋白胨培养基

士锋生物植物组织中氨基转移反应及氨基酸的层析分离2014/04/08

一、目的转氨基作用是植物界普遍存在的一种生化反应，它使蛋白质、氨基酸代谢与碳水化合物、脂肪等代谢沟通起来，在一定程度上起平衡蛋白质、脂肪等代谢的作用。研究植物体转氨基作用，可以使我们了解植物体不同发育阶段代谢动态的一个侧面，从而探索控制其代谢的途径。二、原理通过转氨基作用，α—氨基酸上的氨基可能转移到α—酮基的位置上，结果形成一种新的α—酮酸和一种新的α—氨基酸。所生成的氨基酸可用纸上层析法检出。三、仪器和试剂1．仪器：研钵恒温箱量筒（10毫升）离心机试管3支层析缸滤纸吹风机移液管（0.5ml×