士锋生物细菌总DNA的提取和鉴定实验介绍2014/02/21

(一)试剂：菌株(E.coli);蛋白酶k(20mg/ml);琼脂糖;标准DNA水解液1.10%SDS2.酚/氯仿/异戊醇(1/1/1)3.异丙醇;70%乙醇4.LB培养基：蛋白胨10g,酵母粉5g,NaCl10g加蒸馏水至1升，然后灭菌备用。5.TE缓冲液：10mMTris•HCl,0.1mMEDTA(pH8.0)。6.CTAB/NaCl溶液(5%w/v)：5gCTAB溶于100ml0.5MNaCl溶液中，需要加热到65℃使之溶解，然后室温保存。7.TAE缓冲液(50×)(pH8.0)：每升溶

士锋生物基于基因表达谱的基因调控网络研究模型2014/02/19

基因表达存在组织特异性、细胞周期特异性和外界信号的响应特异性等特性，这些特异性都是由细胞内复杂而有序的调控机制实现的。对基因表达调控机制的研究具有非常重要的理论和应用价值，研究的目的是要回答以下问题：在特定的细胞转态下，有哪些基因发生了表达?它们是通过何种方式被调控的?它们的表达量是多少?这些基因的产物对细胞的生理活动会产生什么影响?诸如这些问题的答案将揭示生命奥秘和指导临床实践，例如，可以通过测量基因的表达调控产物来诊断疾病、指导治疗;可以人为干扰细胞的调控路径来改变细胞的状态等。基因表达调控

士锋生物荧光微球分析技术及荧光微球吞噬实验的操作流程2014/02/18

荧光微球分析技术属于化学材料发展结果，可用于细胞表面抗原的检测、退行性神经病变示踪物、吞噬功能的检测、血流分析、敏感性诊断试剂等，本文介绍了荧光微球分析技术以及荧光微球吞噬实验的操作步骤。荧光微球分析技术简介荧光微球分析技术是近年来化学材料科学活跃发展的产物，各种大小(0.2～10μm)可产生荧光和色彩的人工微球应运而生，目前各种材料人工合成、多种颜色和规格的荧光微球有2大类，一种是表面不带修饰基团的微球，另一种是携带各种化学修饰基团，包括羧基化修饰、氨基修饰、巯基或醛巯基修饰等的微球。下图是D

士锋生物聚合酶链式反应步骤、体系及问题分析2014/02/17

聚合酶链式反应(PCR)是分子生物学常用技术，是体外扩增DNA的方法，设计生物学的各个领域，基本是进了实验室都必须掌握的技术。对于刚入生物门的我们简单了解其步骤、反应体系很有必要。聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)步骤三步：1变性：模板DNA加热变性2退火引物与它的靶序列发生退火，引物DNA量多，使引物和模板在局部形成杂交链3延伸4种dNTP与Mg2+存在的条件下，DNA合成酶催化以引物为起始点，按5'-3'方向进行延伸。上面三步为一个循环，可使拷贝数到达2

士锋生物引物退火温度设计技巧2014/02/14

PCR引物设计中的一个重要参数即是熔解温度(Tm)。这是当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。Tm对于设定pcr退火温度是必需的。在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的Tm低5℃。有几种公式。表4列出确定引物Tmzui常用的两种方法。*个公式来源于高盐溶液中的杂交，适用于小于18碱基的引物。第二个公式根据GC含量估算Tm。确定引物Tmzui可信的方法是近邻分析法。这种

士锋生物聚丙烯酰胺凝胶（PAGE胶电泳）电泳的方法与银染方法2014/02/13

PAGE胶电泳（聚丙烯酰胺凝胶电泳）主要是以PAGE为介质，根据DNA分子大小和电荷分离DNA分子。PAGE胶电泳采用银染法进行显色。银染的原理：一、银离子（一般是AgNO3)和DNA结合;二、还原剂甲醛把Ag+还原成银颗粒，zui终DNA呈现为黑褐色。聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离。聚丙烯酰胺凝胶电泳适宜分离鉴定低分子量蛋白质、小于1Kb的DNA段和DNA序列分析，其装载的样品量大，回收DNA纯度高，长度

士锋生物酵母菌的培养和观察实验方法与步骤2014/02/11

步骤1.观察酵母菌(1)用滴管从甜酒酿的汁液中吸取一滴汁液，滴在载玻片上，用针摊开，盖上盖玻片，在低倍镜下就能清楚地看到甜酒酿的汁液中悬浮着无数酵母菌。再换高倍镜仔细观察一个酵母菌，可以看到酵母菌是椭圆形的单个细胞，细胞中有许多小颗粒，也有几个大的液泡(图示)。有的酵母菌的一端长出大小不同的突起，这是酵母菌的芽体。芽体成长脱落，就成为新的个体，有的芽体在从母体脱落前又长出突起。这种繁殖方法叫出芽繁殖。(2)在盖玻片一边加一滴碘液，从另一边用吸水纸把染液引入盖玻片下。不久就能看到被染成棕褐色的细胞

士锋生物慢病毒载体相关知识介绍2014/02/10

Q:什么是慢病毒?A:慢病毒载体(Lentivector)是用于感染细胞以实现稳定导入基因或siRNA的病毒载体系统，其感染效率可以达到100%。慢病毒和细胞结合后通过包装蛋白将含有目的基因或者干扰序列释放到细胞内。慢病毒RNA通过逆转录酶转录为DNA。DNA整合前复合体进入细胞核并整合到靶细胞的染色体DNA。由于靶基因或基因干扰序列整合到染色体上并且伴随着细胞分裂时dna的复制一起复制，基因的导入能够获得稳定的表达。慢病毒的显著优势在于其可以整合到非分裂细胞，而其他载体(如非病毒载体、腺病毒载

人基质金属蛋白酶-8（MMP-8）elisa KIT使用说明书2014/02/09

人基质金属蛋白酶-8（MMP-8）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中基质金属蛋白酶-8（MMP-8）含量。本公司专业供应Elisa试剂盒，*，*，可免费提供代测服务，咨询：，:实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人基质金属蛋白酶8（MMP-8）水平。用纯化的人基质金属蛋白酶8（MMP-8）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入基质金属蛋白酶8（MMP-8），再与HRP标记的基质金属蛋白酶8（MM

士锋生物猴子干细胞可刺激脑细胞生长2014/02/08

牙髓干细胞是存在于牙髓组织中的一种成体干细胞，可分化形成多种细胞类型。医学研究认为，牙髓干细胞具有重要的治疗潜力。此前，牙髓干细胞已应用于牙齿和颅面细胞的再生。研究小组说，他们的新研究结果表明，牙髓干细胞将来有望应用于细胞疗法和再生医疗领域，尤其是治疗与中枢神经系统相关的一些疾病。研究小组还指出，牙髓干细胞提取方便，医生可以十分方便地从患者牙齿中分离出牙髓干细胞。因此，他们认为可尝试设立牙髓干细胞“银行”，人们一旦患病，就可以提取自己事先保存的牙髓干细胞用于治疗。自体干细胞治疗可大大降低目前移植

士锋生物抗胞外细菌感染免疫介绍2014/02/07

致病性胞外细菌主要有革兰阳性的葡萄球菌、链球菌、志贺菌、霍乱弧菌、致病性大肠杆菌和革兰阴性的脑膜炎球菌和淋球菌、白喉杆菌、破伤风梭菌等。胞外菌致病机制主要通过分泌外毒素和细菌死亡时释放的胞壁内毒素致病。细菌代谢中分泌至菌体外的毒性蛋白为外毒素，其毒性*，可致死。白喉毒素抑制宿主细胞蛋白质合成;破伤风梭菌外毒素可阻断神经元间正常抑制性神经冲动传递;霍乱弧菌肠毒素可激活肠黏膜腺苷环化酶，增高细胞内cAMP水平导致肠道功能紊乱。革兰阴性菌胞壁中的LPS是内毒素，其主要毒性组分是脂质A，导致发热、激活补

技术：新加坡科学家发现“清洁”胚胎干细胞的方2014/02/05

据《印度时报》报道，近日新加坡一医学研究小组在“清洁”人体胚胎干细胞技术上获得重大突破，该小组研究人员称，他们发现了一种可以起到“清洁”人体胚胎干细胞的技术，如若该技术能zui终应用在临床上，那么这将为抵抗癌症、修复受损人体组织起到相当重要的作用。新加坡研究人员介绍说，人体胚胎干细胞能够生长分化成为各种器官及组织，并zui终形成整个人体。但是，有研究表明，未能分化的残余干细胞zui终可能形成致癌细胞，从而带来危害。zui近在《干细胞杂志》（stemCells）上，发表了他们的研究成果，该研究小组

JCB 一种蛋白在细胞核中的调控作用2014/02/04

Wnt信号转导途径是一类在生物体进化过程中高度保守的信号转导途径，调控早期胚胎发育；同时在成体中Wnt信号途径异常活化会导致人类一系列高发性肿瘤的发生。在Wnt信号途径激活的过程中，Dishevelled蛋白在细胞质中接受上游信号通过抑制APC、Axin以及GSK3β等蛋白形成的复合物的功能，从而稳定了细胞质中游离的β-catenin蛋白；细胞质中积累的β-catenin蛋白进入细胞核与TCF/LEF家族的转录因子结合从而开启了下游靶基因的转录。科研人员发现，Wnt信号可以诱导Dishevell

士锋生物APAAP免疫组化实验操作过程2014/01/22

(一)基本原理APAAP(Alkalinephosphatase-anti-alkalinephosphatasetechnique)技术的基本原理为:抗鼠IgG抗体作为桥梁，将鼠源性识别细胞抗原的*抗体与鼠源性的抗碱性磷酸酶单克隆抗体-碱性磷酸酶复合物相连接，使之成为Ag，-Ab１－Ab２-antiAP-AP的复合物。还可通过二抗将APAAP复合物重复叠加起来，从而使多个碱性磷酸酶标记于组织细胞上*抗体所识别的抗原部位，提高了敏感性。(二)方法分离外周血单个核细胞(PBMC)，洗涤后用含10％

人难辨梭状芽孢杆菌毒素A型抗原elisa试剂盒组成和使用说明书2014/01/21

人难辨梭状芽孢杆菌毒素A型抗原酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人难辨梭状芽孢杆菌毒素A型抗原水平。用纯化的人难辨梭状芽孢杆菌毒素A型抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入难辨梭状芽孢杆菌毒素A型抗原，再与HRP标记的难辨梭状芽孢杆菌毒素A型抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的难辨梭状芽孢杆菌毒素A型

士锋生物ELISA实验中的需要的试剂2014/01/19

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。前文(2.2)已述，ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的elisa试剂盒包含以下各组分：(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量测定中);(5)酶联物(结合物)及标本的稀释液;(6)洗涤液;(7)酶反应终止液。1.1免疫吸附剂已包被抗原或抗体的固相载体在低温(2~8℃)干燥的条件下一般可保存6个月

士锋生物免疫共沉淀原理及试剂配制方法2014/01/16

一原理：IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“proreinA"特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精制的proreinA预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的proreinA就能吸附抗原达到精制的目的。实验zui需要注意点就是抗体的性质。抗体不同和抗原结合能力也不同，免染能结合未必能用在IP反应。建议仔细检查抗体的说明书。特别是多抗的特异性是问题。其次，要注意溶解抗原的缓冲液的性质。多数的

士锋生物免疫组化问题及解决办法2014/01/14

1、染色过强原因解决办法抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长降低抗体滴度（一般指浓缩性抗体）抗体孵育时间：室温1小时或4℃孵育温度过高，孵育温度超过37℃一般室温20-28℃DAB显色时间过长或DAB浓度过高显色时间不能超过5-10分钟，以显微镜下观察为准2、非特异性背景染色原因解决办法操作过程中冲洗不充分每步冲洗3×5组织中含过氧化物酶未阻断可再配置新鲜3%H2O2封闭，孵育时间延长组织中含内源性生物素正常非免疫动物血清再封闭血清蛋白封闭不充分延长血清蛋白封闭时间3、染色弱原因解决办法抗体浓度过低

士锋生物非标记抗体免疫电镜实验技术2014/01/10

(一)原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗原进行定位检测。不标记抗体法又可分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。前者利用基因工程方法制备双特异性抗体的F(ab′)2，一个Fab片段与标本中的抗原结合，一个Fab是抗体蛋白的结合片段。在

士锋生物杂交瘤细胞的制备2014/01/09

1）瘤细胞培养（无特殊要求）骨髓瘤细胞呈悬浮或轻微附着形式生长，如附着性生长的细胞多时，用吸管轻轻吹打或轻轻叩击培养容器即可分离下来。通常要维持细胞于指数生长期（细胞培养时间为15~20小时），每3~5天取细胞0.2~1ml移入到10ml新培养液中，其zui大细胞密度不能超过5×105~106/ml。一般使用含有高糖的Dmem培养液，并补加有pH的稳定剂HEPES。2）免疫小鼠和脾细胞的制备免疫：取6~8周龄Balb/C雌鼠，基础免疫2周，静脉再加强免疫一次，3~5天后用于融合。脾细胞制备：1．