一韦仪器加强型冷冻组织研磨仪HGC48用于革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌）核酸提取的前处理方案

一韦仪器加强型冷冻组织研磨仪HGC48用于革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌）核酸提取的前处理方案

冯伟-上海一韦仪器科技有限公司

方案概述

革兰氏阳性菌具有厚而坚韧的肽聚糖细胞壁，是核酸提取中细胞裂解的主要障碍。金黄色葡萄球菌作为临床重要的条件致病菌，其基因组DNA和总RNA的高效提取对于耐药基因检测、病原微生物鉴定及转录组学研究至关重要。传统溶菌酶酶解法耗时长（通常需1～2小时）且效率不稳定，难以满足高通量检测需求。一韦仪器HGC48加强型冷冻组织研磨仪配合0.1mm氧化锆研磨珠的物理破碎方式，利用垂直三维振荡产生的超高剪切力，可在30秒内高效破碎革兰氏阳性菌细胞壁，快速释放核酸。液氮速冻和低温研磨模式可有效抑制内源性RNase活性，保证RNA完整性，适用于临床微生物检测、食源性致病菌监测及细菌耐药性研究等领域。

实验仪器和材料

·       仪器：一韦仪器加强型冷冻组织研磨仪HGC48（配2ml研磨管48孔适配器）

·       材料：金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）过夜培养菌液、0.1mm氧化锆研磨珠、无菌PBS缓冲液、TRIzol总RNA提取试剂、细菌基因组DNA提取试剂盒、氯仿、异丙醇、75%乙醇（RNase-free）、液氮、RNase-free水

实验步骤

1.       金黄色葡萄球菌在MH肉汤中37℃过夜培养至对数生长后期（OD₆₀₀≈1.0），取1.5ml菌液于4℃下8000rpm离心5分钟收集菌体。

2.       用1ml预冷无菌PBS重悬洗涤菌体，离心后弃上清，重复洗涤一次，收集菌体沉淀。

3.       将菌体沉淀转移至预冷的2ml研磨管中，加入0.5g 0.1mm氧化锆研磨珠，并根据提取目标（DNA或RNA）分别加入500μl细菌裂解缓冲液（DNA提取）或1ml TRIzol试剂（RNA提取）。

4.       研磨管浸入液氮速冻1分钟，取出后迅速固定于一韦仪器HGC48适配器中。

5.       设置一韦仪器HGC48研磨参数：频率70Hz，时间30秒，冷冻模式温度-20℃。

6.       启动研磨程序，完成后按照相应试剂盒说明书进行后续核酸纯化步骤（DNA：蛋白酶K消化、离心柱纯化；RNA：氯仿抽提、异丙醇沉淀、乙醇洗涤）。

7.       纯化后的核酸用RNase-free水或TE缓冲液溶解，取适量样品进行琼脂糖凝胶电泳检测，并用Nanodrop测定浓度及纯度。

实验数据

结论

一韦仪器加强型冷冻组织研磨仪HGC48配合0.1mm微细氧化锆研磨珠，可在30秒内高效破碎金黄色葡萄球菌坚韧的细胞壁，大幅缩短核酸提取前处理时间。全封闭研磨体系有效避免气溶胶和样品间交叉污染，高通量适配器支持一次运行处理48个样品，为临床微生物学、耐药基因筛查及细菌转录组研究提供快速、可靠、标准化的前处理方案。

• 加强型冷冻组织研磨仪

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