上海一韦仪器科技有限公司
一韦仪器HG24高通量组织研磨仪高效破碎酵母细胞壁提取总蛋白实验方案
检测样品:酿酒酵母湿菌体
检测项目:高效破碎酵母细胞壁提取总蛋白实验
方案概述:建立一韦仪器HG24高通量组织研磨仪常温干磨法高效破碎酵母细胞壁,释放总蛋白。酵母细胞壁厚实,传统酶解或超声耗时且重复性差。采用垂直三维运动与氧化锆珠高速撞击,实现快速、低温、高重复性破壁,为蛋白组学分析提供稳定前处理。
一韦仪器HG24高通量组织研磨仪高效破碎酵母细胞壁提取总蛋白实验方案
冯伟-上海一韦仪器科技有限公司
实验目的
建立一韦仪器HG24高通量组织研磨仪常温干磨法高效破碎酵母细胞壁,释放总蛋白。酵母细胞壁厚实,传统酶解或超声耗时且重复性差。采用垂直三维运动与氧化锆珠高速撞击,实现快速、低温、高重复性破壁,为蛋白组学分析提供稳定前处理。
实验仪器和材料
· 仪器:一韦仪器HG24高通量组织研磨仪、2ml PE适配器(24孔)、1.0mm氧化锆研磨珠
· 材料:酿酒酵母湿菌体(含水量约70%)、PBS缓冲液、蛋白酶抑制剂
实验步骤
1. 称取湿菌体200mg至2ml研磨管,加入1.0mm氧化锆珠10颗。
2. 加入500μl PBS(含蛋白酶抑制剂),盖紧密封。
3. 设置研磨参数:频率65Hz,时间90秒。
4. 取出后4℃离心(12000g,10min),上清即为总蛋白提取液。
实验数据
结论
一韦仪器HG24高通量组织研磨仪通过垂直三维振荡与微珠撞击,90秒内破碎率>95%,蛋白得率3.2mg/g湿菌,重复性好,优于传统超声法,适用于酵母蛋白组学前处理。
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