【药典】生物药-重组蛋白的HCP定性和定量分析方法思考——从前处理到数据分析

重组蛋白类药物由遗传修饰的原核或真核宿主细胞培养/发酵 产生。在目标蛋白的发酵过程中，由于宿主细胞的凋亡/死亡/ 裂解，宿主细胞产生的其它蛋白质也可能释放到细胞培养基/ 发酵液中，即为宿主细胞蛋白（HCP）。HCP可能会引起机体 免疫反应，从而产生类佐剂作用——增强机体对药物的免疫应 答。HCP也可能是一些酶类，具有分解目标蛋白或人体蛋白的 作用，导致药物不稳定或进入人体后引发一系列不良反应。因 此，生物制药公司不断优化纯化工艺，从而控制终产品中HCP 的种类和含量。 目前常用的HCP检测方法为酶联免疫法（ELISA）。该方法具 有较高的灵敏度，但也存在一些局限性。LC-MS方法是ELISA 的有利补充。与ELISA相比，LC-MS方法具有以下优点：第 一，可以鉴定HCP的种类；第二，可以获得单个HCP的含量信 息；第三，可用于不同工艺所得产品的横向对比。由于LC-MS 的以上优点，LC-MS作为HCP的检测受到广泛关注和使用。例 如，Huang等[1]以NIST mab为例，发展了基于LC-MS检测HCP 的前处理方法。LC-MS在HCP检测中的广泛使用，推动了相 关分离、检测和数据分析技术的发展。但多样的技术选择也为 HCP的分析带来一些疑问： 第一、 大部分关于HCP的研究均以抗体为分析对象。在抗体 的分析中，native酶解可有效抑制主蛋白的酶切，从而提升HCP 的鉴定。在生物制药中，除抗体以外，还有大量的重组蛋白产 品，这些产品的酶解应该采用什么前处理方法？ 第二、 在HCP的检测中有nanoLC-MS和UHPLC-MS两种分离 检测方法，这两种方法各自的优缺点是什么，应该选择哪一种 方法？ 第三、 常听人说，DIA采集数据有利于提升鉴定量，是否用 DIA采集HCP可显著提升HCP鉴定量？

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