2021年央视3·15晚会，报道了河北省青县养殖户在养羊过程中，为了增加出肉率，在饲料中偷偷混入瘦肉精的情况。据统计，我国近十年瘦肉精相关事件及通报几十起，几乎每年都能检测出含有“瘦肉精”的肉类及其制品。“瘦肉精”主要是一类叫做肾上腺素受体激动剂的物质，包括克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A等物质，在养殖过程中使用，可以促进动物机制的新陈代谢，降低骨骼肌脂肪，增加瘦肉率并改善肉质色泽，长期食用残留瘦肉精的畜禽肉，药物在体内积蓄到一定程度时，会引起各种不良反应，如心律失常、过敏性丘疹、呕吐等，严重还可能诱发冠心病、高血压，甚至恶性肿瘤。我国已明令禁止在牲畜喂养过程中使用任何瘦肉精。

瘦肉精在毛发中的残留时间很长，停用12周以上仍能够被检测，农业农村部据此制定了利用动物毛发样品检测瘦肉精的技术标准。2022年9月，农业农村部正式颁布公告，发布并开始实施《动物毛发中克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A的测定》检测方法，用于检测动物毛发中瘦肉精残留量。高效液相色谱-串联三重四极杆质谱法测定瘦肉精具有高灵敏性、操作简便、分析自动化、节省时间、重现性好、效率成本比价高、假阳性率低等优点。本应用中心参考以上标准，建立了使用超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱测定动物毛发中“瘦肉精”残留的快速且高灵敏度的分析方法，为食品安全检测提供有效技术支持。

关键词：LC-MS/MS、食品、养殖、动物毛发、瘦肉精、农业农村部公告 第600号

实验部分

仪器

表1 液相色谱串联三重四级杆质谱仪

表2 液相色谱串联三重四级杆质谱仪检测参数

试剂及标准品

      试剂：质谱级甲酸(CNW)、色谱级甲醇（Merck）、色谱纯乙腈（Merck）；柠檬酸钠、氯化钠、乙酸钠（国药集团）；氨水（CNW）；十二烷基磺酸钠（阿拉丁）

       纯水：18.2 MΩ·cm去离子水（25℃）；

      标准品：克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A客户提供；内标克仑特罗-D9、莱克多巴胺-D6、沙丁胺醇-D3和苯乙醇胺A-D3均购自阿尔塔。

样品前处理

      参考农业农村部公告第600号，具体前处理步骤如下：

样品制备：

      选取动物背部毛发，根部剪断，保存备用。取适量毛发加入烧杯中，加入十二烷基磺酸钠溶液，于超声清洗器上超声清洗30 min，水洗净毛发，40 ℃电热干燥箱中烘干，烘干后将其制成粉末。

样品前处理：

       称取试样于离心管中，加入混合内标工作溶液，0.1 mol/L盐酸，涡旋混匀，于60 ℃水浴中水解4 h，7000 r/min离心10 min，取上清液备用。固相萃取柱依次用少许甲醇，水预洗，取全部备用液过柱，依次用少许水，甲醇淋洗，抽干，用5%氨水甲醇溶剂洗脱，收集洗脱液，于50 ℃氮吹吹干，用0.1%甲酸乙腈溶液溶解，过0.22 um滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

测试结果

灵敏度 

      精密称取混合标准工作溶液和混合内标工作溶液适量，用0.1%甲酸乙腈溶解并定量稀释成浓度为0.50 ng/mL的溶液，测试各化合物信噪比（峰-峰）。

表1 各化合物信噪比 

图2  各化合物信噪比结果

样品测试结果

      动物毛发样品经过2.6前处理后测试结果如下所示。

表2 动物毛发样品测试结果

*ND=Not Detected

表3 动物毛发样品测试结果

加标回收率结果

       在试样中分别加入100 ng/mL的混合标准工作液10 uL、25 uL、50 uL，按照3.6前处理方法进行样品处理，测试结果如下所示。沙丁胺醇加标回收率在86.20%-103.11%，莱克多巴胺加标回收率在80.64%-117.28%，克仑特罗加标回收率在81.93%-109.23%，苯乙醇胺A加标回收率在71.83%-98.40%。

表4 各化合物加标回收率测试结果 

结语

      本文使用LC-MS/MS对动物毛发中克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A含量进行检测，考察方法的线性、灵敏度、稳定性、加标回收率。各化合物线性系数大于0.998；0.5 ng/mL的标准物质溶液信噪比（峰-峰）均大于27；标准溶液在浓度为1 ng/mL、2 ng/mL、5 ng/mL和10 ng/mL时连续6次进样，保留时间RSD不超过0.16%，相对峰面积RSD均小于10%；各化合物在100 ng/mL浓度水平的加标回收率在80%~120%之间。以上结果表明，该方法灵敏度高，精密度良好，满足农业农村部关于动物毛发中克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A含量测定的要求。

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•  附录

设备与耗材方案

一、EXPEC 5210配置详情

二、标准品

• 液相色谱-三重四极杆质谱联用仪

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