基因毒性杂质（或遗传毒性杂质）是指化合物本身能够直接或间接损伤细胞DNA，产生基因突变或体内诱变，具有致癌可能或者倾向的一类物质。近年来，已经上市的药品中由于存在痕量的基因毒性杂质而引发大规模医疗事故，继而药品被召回的事件时有发生。FDA、EMA、ICH先后发布了对基因毒性杂质的指导原则，推荐使用毒理学关注阈值TTC（1.5 μg/day）作为基因毒性杂质的可接受限度。我国2020版《中国药典》新增了《遗传毒性杂质控制指导原则》，药企在研发过程中越来越关注基因毒性杂质的控制和检测。磺酸酯类化合物作为一类典型的基因毒性杂质，可以直接或间接地代谢活化后的烷基化DNA。

现有的磺酸酯类化合物气相和气质检测方法通常需要进行衍生，操作繁琐。运用GC进行检测，方法定性能力差且灵敏度低，GC-MS方法虽然可以提高检测灵敏度，但对于一些基质复杂的药物抗干扰能力较差。相较之下，GC-MS/MS方法具有较高的抗干扰能力以应对复杂的药物基质，且检测灵敏度高、准确性好，是检测药品中磺酸酯类化合物的有效手段。因此，本应用中心针对三种对甲苯磺酸酯基因毒性杂质，基于自主研制的GC-MS/MS平台建立了对甲苯磺酸酯的快速且高灵敏度的检测方法。

关键词：GC-MS/MS、医药、口服药剂、对甲苯磺酸酯、基因毒性杂质

实验部分

仪器

表1气相色谱—三重四极杆串联质谱仪

表2 气相色谱—三重四极杆串联质谱仪参数

试剂及标准品

标准品：对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯、对甲苯磺酸异丙酯均购自Stanford Analytical Chemicals，于4℃冰箱保存。

试剂：丙酮和乙酸乙酯均为色谱级。

样品前处理

（1）水溶性药品

称取药品粉末，加水振摇均匀，超声10 min，再加入乙酸乙酯，振摇混匀后充分超声提取，取上层有机相经无水硫酸钠除水后，过滤膜，上机测试。

（2）脂溶性药品

称取药品粉末，加入乙酸乙酯，振摇均匀，超声10 min，过滤膜，上机测试。

线性和检出限

在对应的线性范围内，3种对甲苯磺酸酯类化合物的线性系数r均在0.995以上，线性良好。以5 μg/L 标准溶液进样，按照S/N=10和S/N=3计算定量限和检出限，检出限为0.4~0.8 μg/L，定量限为1.3~2.7 μg/L，具体结果见表3。对甲苯磺酸酯类化合物总离子流图如图1所示。 

图1  20.0 μg/L对甲苯磺酸酯类化合物总离子流图

表3 对甲苯磺酸酯各组分信噪比（5 μg/L浓度水平下）以及检出限和定量限

加标回收率

对空白药品进行加标回收率测试，加标浓度为1 μg/g，连续进样三针，各目标化合物计算浓度（单位为μg/L）与回收率结果如下所示，3种对甲苯磺酸酯平均回收率在80%~110%之间。

样品测试

按照2.3中样品前处理方法处理实际药品，实际药品中三种对甲苯磺酸酯均未检出，色谱图见图2。

图2  实际药品色谱图

结语

本文建立了一种使用三重四极杆气质联用仪测定药品中3种对甲苯磺酸酯类化合物的分析方法。本文考察了该方法的线性、精密度、灵敏度和准确度等，结果显示标准曲线线性良好，相关系数大于0.995，方法精密度低于10%，检出限低于1 μg/L，定量限低于3 μg/L，回收率在80%~110%之间。因此，本方法可以对药品中3种对甲苯磺酸酯类化合物进行快速、准确、灵敏的定量分析。

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l 附录

设备与耗材方案

一、EXPEC 5231 系统标准配置详情

二、标准品

• 气相色谱-三重四极杆质谱联用仪GC-MSMS

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