随着人民生活水平的提高，食品安全问题越来越受到重视。真菌毒素污染是造成大米等粮食安全的长期隐患之一，已列入国家食品安全风险监测体系。真菌毒素是由真菌产生的具有毒性的次级代谢产物，其来源多样、稳定性强、健康危害严重。据报道，在全球范围内，每年约有 25%的农产品受到不同程度的真菌毒素污染，特别是我国的主要粮食作物——大米、玉米、小麦。因此，预防和控制粮食真菌毒素污染是保障食品质量安全的主要内容，故针对谷物及其制品中真菌毒素多组分、高通量的快速检测技术亟待开发。

本文依据粮油检测标准《LS/T 6133-2018  粮油检验 主要谷物中 16 种真菌毒素的测定 液相色谱-串联质谱法》，建立了使用谱育科技自主研发生产的超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪 EXPEC 5210  测定大米中 33 种真菌毒素化合物含量的快速且高灵敏度的检测方法，为大米中真菌毒素类化合物含量检测提供参考。

样品、标准品、试剂和设备

    仪器：EXPEC 5210 三重四极杆串联质谱仪；

    样品：大米；

    标准品：33 种真菌毒素的标准品购于天津阿尔塔；

    试剂：甲醇、甲酸、均为色谱纯，水为超纯水。

液相和质谱条件

正离子：

负离子：

样品前处理

    （1） 取样：精密称取 0.5 g 供试品粉末（研磨过筛后），置 15 mL 离心管中；

    （2） 溶剂重复提取：加入 2 mL 甲醇：水（3：2）振荡 10 min 后，超声 10 min，离心取上清液；残渣中加入 2 mL 乙腈（含 1%甲酸）, 振荡 10 min 后，离心取上清液；残渣中再次加入 1 mL 甲醇：水（3：2），振荡 10 min 后，离心取上清液，最终合并三次提取的上清液；

    （3） 上样：上清液过 0.22 um 滤膜，上机检测。

典型色谱图

    按照上述 2.2 条件上机测试，真菌毒素的典型色谱图，如图 1 和图 2 所示。

图 1 正离子模式下真菌毒素典型色谱图（以 FB1 计，10ng/ml）

图 2 负离子模式下真菌毒素典型色谱图（以玉米赤霉烯酮计，2ng/ml）

线性和检出限

    标准曲线溶液配制：以空白大米基质配制系列梯度的真菌毒素标准溶液，以目标物的定量离子色谱峰面积为纵坐标，目标物标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线,在对应的线性范围内，相关系数 r 值均在 0.995 以上。

表 1 正离子模式下部分真菌毒素标准曲线信息

表 3 负离子模式下部分真菌毒素标准曲线信息

重复性

    从真菌毒素储备液中吸取一定量的标准品，以空白大米基质稀释成标准曲线低（标曲点 3）、中（标曲点 6）、高（标曲点 9）浓度的对照品，进样 6 次，考察保留时间和峰面积的重复性，结果图 3 和 4 所示。由图 3 和 4 可知，真菌毒素的保留时间 RSD 在 0.20%以下，峰面积 RSD 均在 5%以下，精密度较好。

回收率

    从真菌毒素储备液中吸取一定量的标准品，以空白大米基质稀释成低、中、高浓度水平的标准品。经过2.3 样品前处理得到的回收率结果图5 和6 所示。真菌毒素的回收率在80 -120%

之间。

样品测试

    按照 2.3 中样品制备方法处理样品，批处理结果如下图所示，结果表明大米中有 3.6 μg/kg的伏马毒素 B3 出。

结语

    本实验考察了 33 种真菌毒素的线性、精密度、灵敏度、回收率等指标。实验结果表明 33 种真菌毒素相关系数 r 均大于 0.995，线性良好；定量限在 0.1-10 μg/kg 之间。在低、中和高的浓度下，连续进样六针 33 种真菌毒素的保留时间 RSD 在 0.20%以下，峰面积 RSD 均在 5%以下，精密度较好，并且在低、中和高的浓度下，33 种真菌毒素的回收率在 80-120%之间。由此可见，使用谱育科技高灵敏、高抗污染能力的 5210 系统可以对大米中的 33 种真菌毒素残留量进行快速、准确、灵敏的定量检测。

附录

EXPEC 5210型 LC-MSMS 配置清单

• 液相色谱-三重四极杆质谱联用仪

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