简单扩增体系中引物设计原则2017/04/14

引物在PCR反应中处于关键作用，引物决定着扩增的特异性和扩增的效率。而在目前DNA的化学合成技术非常成熟的情形下，引物设计是否合适是我们应更为关注的层面。现在有很多的免费的软件或网络资源(http://frodo.wi.mit.edu/primer3/)能辅助我们进行引物设计，这使我们总能找到适合我们自己应用的引物设计工具。笔者用得较多的引物设计软件有oligo6.0，Primerpremier5。需要说明的是经过细致推敲和计算的引物并不能保证扩增一定能够成功或，但严密的设计并系统地考虑一些应该

如何在DNA序列中找到序列标签位点2017/04/14

NCBI的“electronicPCR(e-PCR)”工具是UniSTS资源库的一部分，可以用来寻找一段目的dna片段中的STS标记物。UniSTS(http://www.ncbi.nih.gov/genome/sts/)能提供所有有关STS标记物的资料，包括引物序列、产物大小、作图信息和别名。与之相链接的其他NCBI资源如Entrez、LocusLink和MapViewer也同样提供这些信息。e-PCR通过搜寻具有正确的方向和间距的序列且这个序列能代表用于扩增STSs的PCR引物，来寻找一段D

几种转染方法对比2017/04/10

转染方法原理主要应用特点厂家及产品DEAE－葡聚糖法带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞瞬时转染相对简便、重复比磷酸钙好,但对细胞有一定的毒副作用,转染时需除血清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS细胞系sigma-aldrich(DEAE-DextranTransfectionKit)磷酸钙法磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞稳定转染,染瞬转染不适用于原代细胞（所需的DNA浓度较高）,操作简便但重复性差,有些细胞不适用细胞建议用CSCL梯度离心，

血涂片的制备和细胞大小的测量2017/03/27

目的要求1.掌握血涂片的制备方法；2.认识红细胞及各种白细胞的典型形态；3.掌握显微测微尺的使用方法。实验原理涂片技术是制备血液样品zui常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。实验用品1.器材:医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片、双凹片（推片）。2.试剂:Wright’s染液：Wright’s色素粉末0.1g，溶于60ml甲醇。方法与步骤一.血涂片的制备与血细胞的观察二.显微测微尺的使用采血前用70

植物多倍体鉴定技术2017/03/20

多倍体广泛分布于植物界，如普通小麦是异源六倍体，棉花是四倍体，栽培草莓是八倍体等，多倍体产生途径除自然发生外，化学药剂诱导是很有效的途径。不管以何种方式产生，检测、鉴定多倍体就显得很重要和迫切。鉴定多倍体，可采用间接和直接的方法。间接方法包括形态学和细胞学的观察，直接法是直接对试材检测染色体的数目。一般来讲，多倍体植物在形态学和细胞学上的特征表现为:气孔、花器、花粉粒、种子、果实甚至叶片等明显变大，单位面积叶片上的气孔数目减少而密度降低等。考虑到染色体观察、记数较为烦琐，首先对试材从形态学和细胞

细胞荧光化学实验2017/03/08

荧光法较一般光学方法具有灵敏度高、特异性强、方法简便等优点，因此近年来荧光组织化学特别是免疫荧光技术有了很大的发展。利用荧光技术可研究细胞内化学成分的分布与定位，研究细胞与组织中物质的吸收与转运，进行病理鉴别以及细胞免疫等方面的研究。当用一种波长的光(如紫外光)照射某种物质时，这种物质会在极短的时问内发射出较照射波长为长的光(可见的光)，这种光就称为荧光。有些生物材料受到紫外线照射后能直接发出荧光称自发荧光(或直接荧光)；有的生物材料受紫外线照射后并不发光，但当它吸收荧光染料后，也同样产生荧光，

细胞冻存、解冻方法以及细胞计数2017/02/22

一、细胞冷冻保存1、材料：生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO（SigmaD-2650）、无菌塑料冷冻保存管（Nalgene5000-0020）、0.4％（w/v）trypanblue（GibcoBRL15250-061）、血球计数盘与盖玻片、等速降温机（KRYO10SeriesII）。2、冷冻保存方法：（1）传统方法：冷存管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16～18小时（或隔夜）→液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量亡，亦可跳

细胞培养的方法介绍2017/02/20

1、复苏细胞1）液氮中取出所要的细胞，37℃水浴锅中快摇，勿让水入盖，同时将培养液放入37℃水浴锅中温育；2）将细胞离心，同时进入超净台，无菌操作，将培养液瓶用卫生纸擦干，除菌后放入超净台，将盖子打开，瓶子放在架子上，瓶口朝火焰，将吹打吸管灭菌后吸部分培养液进入培养皿；3）离心完毕，将细胞冻存液倾倒掉，吸入约1ml培养液到冻存管中，反复吹打，悬起细胞，吸入皿中，吹打，标好；4)显微镜下观察，呈圆形，不结块，不聚在一起，浓度适宜并且均匀，放入培养箱中培养。2、传代：1）倒掉培养液，加含5%胰酶的培

植物细胞骨架的观察2017/02/16

细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。本试验采用去垢剂TritonX-100的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。三、实验用品(一)材料洋葱（二）器材显微镜、载玻片、滴

玉米减数分裂观察2017/02/13

减数分裂(meiosis)是生物在形成性细胞过程中的一种特殊的细胞分裂方式。在此过程中，二倍体(2n)的性母细胞，连续进行2次细胞分裂，而染色体仅分裂1次。结果，在1个性母细胞所形成的4个子细胞中，染色体数目减少-半。也就是说每个子细胞中只具有单倍的染色体(n)。减数分裂在遗传上具有重要的意义。性母细胞(2n)经过减数分裂，形成染色体数目减半的配子(n)。经受精作用，雌、雄配子融合为合子，染色体数目恢复为2n。这样，在物种延续的过程中，确保了染色体数目的恒定，从而使物种在遗传上具有相对的稳定性。

细胞生理活动的实验观察2017/02/06

【实验目的】通过制片与观察加深理解细胞的运动、吞噬等生理活动。【实验用品】一、材料和标本雄性蟾蜍、小白鼠、l％鸡血悬液、6％淀粉肉汤、草履虫。二、器材和仪器光镜、2ml注射器、载玻片、盖玻片、解剖器材、滴管、移液管、试管、玻璃片、黑纸。三、试剂0.3％台盼兰、1％刚果红。【实验内容】一、细胞的吞噬活动(一)原理白细胞是机体防御系统中能游走的单位。它分为粒细胞系、单核细胞系、淋巴系三类。它们有许多生理功能，如游走性、变形运动、趋化性、吞噬异物等。在白细胞中，以粒细胞、单核细胞的吞噬活动较强，故称此

动物细胞培养及外源基因的导入实验2016/12/05

细胞培养是现代生物学研究中应用的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等；二是可以人为地严格控制研究条件，便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响，有利于单因子分析；三是研究的样本可以达到比较均一性。常用的细胞系均是性质均一的细胞，需要时还可采用克隆化等方法使细胞进一步纯化；四是研究的内容便于观察、检测和记录。体外培养的细胞可采用显微镜，电镜等直接观察记录，充分满足实验的要求。另外还具有研究范围比较广泛，

细胞和细胞内含物的观察2016/11/21

细胞质内含有多种细胞器。有些细胞器如线粒体、高尔基体、内质网、溶酶体等普遍存在于各种细胞中，而另有些细胞器如叶绿体，只存在于植物细胞中。细胞质内的这些结构，除叶绿体外，一般在光学显微镜下不易看见，必须经过一定的固定染色方法处理后，才能看到大多数细胞器，或直接用相差显微镜观察。线粒体线粒体是一种动态的易变结构。经过处理在光学显微镜下呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。线粒体的形态和数量随不同生物、不同组织及不同生理状态而发生变化，例如肝细胞、胰细胞的线粒体通常呈线状，成熟的卵细胞内线粒体呈颗粒状，肾细胞

染色体银染色法2016/11/03

一、实验目的通过实验，掌握染色体银染方法。二、实验原理银染核仁成形区的方法，zui早是Goodpasture和Bloom(1975)提出的Ag-As技术。应用这种技术使人类、哺乳动物、两栖类、植物等的核仁形成区(NOR)特异性染为黑色。这种银染色阳性的NOR称为Ag-NOR。银染方法的原理可能是由于转录的rDNA部分有丰富的酸性蛋白，它们具有S－H键和S－S键，容易将Ag+还原为Ag的颗粒，从而在活性的核仁形成区镀上银，呈现为黑色的区域。本实验将介绍染色体核仁形成区的银染显示法（Ag-NOR），

孚尔根[Feulgen]核反应染色法2016/10/27

一、实验目的学习和掌握孚尔根反应染色法，鉴定植物细胞核内染色体上DNA的存在。二、实验原理DNA是主要的遗传物质，集中于染色体上。1924年孚尔根首先用席夫试剂(Schiff)作试验，鉴定了染色体上DNA的存在，故称为孚尔根染色法。孚尔根染色法的反应原理主要与席夫试剂的化学性质有关，此试剂的基本成分是碱性品红，偏亚硫酸氢钠(NaHSO3)和盐酸.碱性品红的主要成分是三氨基三苯甲烷氯化物。碱性品红原为桃红色，当与亚硫酸作用时还原，使醌型变为苯型，由桃红色变为无色透明的N-亚磺酸亚硫酸副品红碱，当它

细胞培养环境2016/10/18

1实验室设计细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响.细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁,空气清新,干燥和无烟尘.细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室.2常用设施及设备(1)超净工作台:也称净化工作台,分为侧流式,直流式和外流式三大类.(2)无菌操作间:一般由更衣间,缓冲间和操作间三部分组成.操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱,离心机,倒置显微

神经胶质细胞培养2016/10/12

神经细胞（神经元）不易培养，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或加入神经生长因子和胶质细胞因子时，可出现一定程度的分化，长出突起等现象，但很难使之增值。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养，不仅能获得生长的胶质细胞，也可形成能传代的二倍体细胞系。一般说来，胶质细胞在培养中生长不稳定，不易自发转化，但对外界因素仍保持很好的敏感性，可用ROUS病毒和SV4等诱发转化。养方法如下：1、从手术室无菌取脑髓灰质或白质后，仔细剥除脑膜、血管和纤维成分，置h

巨噬细胞原代培养2016/09/26

1．实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml（勿注入肠内）。2．引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入70％酒精中3～5秒。3．置动物于解剖台上，用针头固定四肢，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁。4．再用70％酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中，同时从两侧用手指揉压腹膜壁，令液体在腹腔内充分流动。5．用针头轻轻挑起腹壁，使动物体微倾向一侧，使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。6．小心拔出针头，把液体注入离心管中，250g4℃离心10分钟，去上清

定位候选克隆2016/09/13

当前，人类基因组研究的重心正在由“结构”向“功能”转移，一个以基因组功能研究为主要内容的所谓“后基因组时代”(post-genomics)，也即功能基因组(functionalgenomics)时代，即将到来。如何获取基因的功能信息，即与人类重大疾病和重要生理功能相关的基因信息，就摆在了我们面前。定位候选克隆策略(positionalcandidatecloning)是传统定位克隆(positionalcloning)的改进和发展，并以其在克隆疾病相关基因中的有效性而日益受到重视。人类基因组计划

cDNA合成的随机引物法2016/08/30

cDNA合成时，合成*链目前主要有三种方法。而且每一种方法之间存在着差异性，这些相对的特异性使得所得到的cDNA的数量和种类有所不同。这篇文章为大家介绍随机引物法的优劣势和特性。随机引物法是三种方法中特异性zui低的。引物在整个转录本的多个位点退火，产生短的，部分长度的cDNA。这种方法经常用于获取5"末端序列及从带有二级结构区域或带有逆转录酶不能复制的终止位点的RNA模板获得cDNA。为了获得zui长的cDNA，需要按经验确定每个RNA样品中引物与RNA的比例。随机引物的起始浓度范围为50到2