用氯化钙制备新鲜的大肠杆菌感受态细胞方法2017/07/04

下面的简单方案是Clhen等（1972）所用方法的变通方案，常用于成批制备感受态细菌，这些细菌可使每微克螺旋质粒ＤＮＡ产生5x106-2x107个转化菌落，这样的转化效率足以满足所有在质粒中进行的常规克隆的需要。该方法*适用于大多数大肠杆菌菌株，并且比方案Ｉ快速，重复性更好。该法制备的感受态细胞可贮存于-70℃，但保存时间过长会使转化效率在一定程度上受到影响。１）从于37℃培养16-20小时的新鲜平板中挑取一个单菌落（直径２－３mm），转到一个含有100mlLB或SOB培养基的1L烧瓶中。于37

RNAi及其在植物遗传改良中的应用2017/06/29

RNAi即RNA干涉(或RNA干扰)是指双链RNA导入细胞后并被切割成21～23个核苷酸长度的短核苷酸双链，在其它作用因子的参与下能够特异地与其同源的mRNA结合并导致其降解，从而使得内源基因不能表达，导致内源基因的沉默。自1998年Fire等在线虫中发现并阐明以来，RNAi已经在其它动物、植物和真菌中被证实。研究表明参与该过程的许多基因具有高度的保守性，这可能是生物调控基因表达及抵御病毒侵染或转座子诱导DNA突变的一种共有的古老生理机制。RNAi所具有的特异性、稳定性、、快速以及不改变基因组的

RNAi技术专有名词详解2017/06/26

1.RNAi：（RNAinterference）RNA干扰一些小的双链RNA可以、特异的阻断体内特定基因表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰（RNAinterference，RNAi，也译作RNA干预或者干涉）。它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制。2.sirna：(smallinterferingRNAs)小干扰RNA一种短片断双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA，这个过程就是RNA干扰途径（RNAinterferenc

质粒提取2017/06/22

一、导论已经提出过许多方法用于从细菌中提纯质粒dna，这些方法都含有以下3个步骤：（一）细菌培养物的生长从琼脂平板上挑取一个单菌落，接种到培养物中(有含有行当抗生素的液体培养基中生长)，然后从中纯化质粒，质粒的提纯几乎总是如此。现在使用的许多质粒载体（如pUC系列）都能复制到很高的拷贝数，惟致只要将培养物放在标准LB培养基中生长到对数晚期，就可以大量提纯质粒。此时，不必造反性地扩增质粒DNA。然而，较长一代的载体(如pBR322)由于不能如此自由地复制，所以需要在得到部分生长的细菌培养物中加入氯

士锋siRNA设计指南2017/06/12

UsingsiRNAforgenesilencingisarapidlyevolvingtoolinmolecularbiology.ThereareseveralmethodsforpreparingsiRNA,suchaschemicalsynthesis,invitrotranscription,siRNAexpressionvectors,ａndPCRexpressioncassettes.Irrespectiveofwhichmethodoneuses,thefirststepinde

用PCR扩增cDNA库中的特异序列2017/06/07

zui常用的基因分离方法需要建立组织或细胞RNA的cDNA库，然后用抗体或DNA探针筛选出感兴趣的基因。虽然这个方法已成功地克隆了大量基因，但建立和筛选CDNA库是一项非常耗时．费力的工作，而且用寡聚核苷酸作探针进行筛选需大量蛋白质序列结构的资料。聚合酶链的反应（PCR）方法可使一种特异DNA扩增几百万倍，并已成为分子克隆和诊断的十分有用的工具。zui近，TAQDNA聚合酶的使用极大地简化了PCR方法。该酶在75℃左右有很宽的zui适温度区，在小于95℃以下重复保温仍能存活，更重要的是，该酶活性

ELISA试剂盒2017/06/04

试剂盒组成及试剂配制1、酶标板：一块（96孔）2、标准品（冻干品）：2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为8,000pg/ml，将其稀释为1,600pg/ml后，再做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成1,600pg/ml，800pg/ml，400pg/ml，200pg/ml，100pg/ml，50pg/ml，25pg/ml，样品稀释液直接作为空白孔0pg/ml。如配制800pg/ml标准

ELISA试剂盒说明书2017/06/04

ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪纤维蛋白原（Fbg）水平。用纯化的猪纤维蛋白原（Fbg）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入纤维蛋白原（Fbg），再与HRP标记的纤维蛋白原（Fbg）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的纤维蛋白原（Fbg）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪纤维蛋白原（Fbg）

试剂盒制备方法2017/06/01

elisa试剂盒制备方法ELISA试剂盒不是容易的事情。主要的限制是你所用抗体的质量。另外你需要配制出特定成分的稀释液，保证结果的真实可靠以及良好的重复性。这两方面过关了，生产工艺并不复杂，你只要有生产抗体的平台，再加上酶标仪基本就可以搞定了。ELISA试剂盒包括以下步骤：1)抗原表位的计算机筛选；2)抗原的制备；3)血清的采集；4)间接ELISA方法的建立；5)间接ELISA方法的敏感性和特异性验证；6)试剂盒的稳定性验证；ELISA试剂盒对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异

士锋DNA双链缺口修复的新发现2017/05/31

DNA双链出现缺口被认为是发生癌症的一个重要原因。zui近，美国密苏里州斯托瓦斯医学研究所的研究人员在研究DNA双链缺口修复中又有了新发现，他们提出尽管有机体内存在天然的检测和修复缺口的机制，但是与DNA损伤修复有关的因子必须首先绕过组蛋白。组蛋白既能保护DNA不受伤害但同时也阻碍了DNA的修复。这或促进科学家早日找到癌症治疗的新策略。这些发现公布在2004年12月17日的《科学》杂志上。研究DNA修复也是探索生命的一个重要方面，而且与军事医学、肿瘤学等密切相关。对不同的DNA损伤，细胞可以有不

cdc25和chk1与细胞凋亡2017/05/24

cdc25和chk1在DNA破坏中的作用Cdc25isaproteinphosphataseresponsiblefordephosphorylatingａndactivatingcdc2,acrucialstepinregulatingtheentryofalleukaryoticCellsintotheM-phaseofthecellcycle.Cdc25isphosphorylatedthroughoutinterphasebutnotinmitosis.Theprimarysitefor

PI3K/Akt通路的负性调节因子-PTEN2017/05/22

10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物((Phosphataseａndtensinhomologdeletedonchromosometen,PTEN)为1997年新发现的抑癌基因，位于10q23.3，其转录产物是一种膜结合型脂质磷酸酶，作为肿瘤抑制因子在多种系统中下调PIP3的表达，在胚胎发育、细胞生长、分化、凋亡和迁移的调控中发挥重要的作用。PTEN具有PI3K活性，能拮抗PI3K的作用，通过催化PIP3的3位脱磷酸下调PIP3的水平。

植物细胞色素P450（CYP450）2017/05/12

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物细胞色素P450（CYP450）水平。用纯化的植物细胞色素P450（CYP450）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入细胞色素P450（CYP450），再与HRP标记的细胞色素P450（CYP450）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的细胞色素P450（CYP450）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下

联会复合体的染色与观察2017/05/09

实验目的1.学习光学显微镜下显示联会复合体的实验技术2.观察光镜下联会复合体的形态结构实验原理联会复合体是减数分裂前期同源染色体配对形成的非*性核内特殊结构，典型的联会复合体由三股平行的线状结构组成，即两条平行侧线和一条纤细的中央轴组成。一般开始于偶线期，成熟于粗线期，消失于双线期。它与减数分裂三个重要环节同源染色体联会、交换以及分离有着密切关系。大量工作表明，联会复合体在真核生物的减数分裂过程中是普遍存在的。实验用品一、材料雄性小白鼠二、器材离心机、显微镜、水浴、培养皿、镊子、剪刀、吸管、烧杯

核糖核酸酶P主要功能2017/05/06

核糖核酸酶P是一种核糖核酸酶。核糖核酸酶P也是一种核酶，即由一个RNA分子发挥催化活性，它是*个被发现的蛋白质以外具有催化活性的生物大分子。它的功能是剪切tRNA分子中RNA上多余的或前体的多余序列。[1]它的发现者悉尼·奥尔特曼在1970年代在研究前体tRNA中发现它可以剪切RNA的5'端，悉尼·奥尔特曼也因此获得了1989年度的诺贝尔化学奖。[2]近期的研究发现核糖核酸酶P也具有一些新的功能，[3]例如人类细胞核中的核糖核酸酶P对于正常并有效地转录多种非编码rna(包括tRNA、5SrRNA

动物细胞培养技术介绍2017/05/06

动物细胞培养已成为生物制药领域zui重要的关键技术之一，并以其研究的深入和进展推动生物技术产业的迅速发展。专家预言：蛋白治疗药物如糖蛋白、抗体和多肽药物仅仅只是刚刚开始进入市场，预计在下一个10年或20年会有更为快速的发展。届时，蛋白治疗药物的迅速增长和市场需求将远远超过*的生产能力。动物细胞培养规模化生产重组蛋白和抗体的工艺选择可考虑使用当前较成熟的工业化支持技术平台，以缩短产品工艺研发的时间，加快工业化进程。当前已获FDA批准的生物技术产品以及公开发表的生产工艺中，占有主流优势的是搅拌式生物

细胞融合（Cell fusion）实验2017/05/06

实验原理诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。1.病毒诱导融合：有许多种类的病毒能介导细胞融合，zui常用的是灭活的仙台病毒（HVJ），为RNA病毒。病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸附许多病毒粒子，接着细胞发生凝集，几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合，胞浆相互交流，zui后形成融合细胞。2.化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中zui常用的

细胞培养室管理规定2017/05/06

1、细胞培养室操方法。2．实验人员进入该实验室进行实验工作时，必须更换、穿戴好工作服、鞋、帽、口罩。有关细胞培养的操作均在超净台上进行，严格按无菌程序操作。3．实验人员在进行实验前必须熟悉实验内容、操作步骤及各类仪器的性能和操作方法，严格执行操作规程，并做好必要的安全防护。4．严禁将与实验无关的易燃、易爆及其他有毒有害物品带入实验室；在本实验室内不得进行微生物等其它易污染物的培养。5．细胞培养室中的昂贵设备，未经许可，不得擅自开关。精密仪器必须经过专门培训方能上机操作，并严格遵守操作规程。6．实

染色体G-带的分带技术2017/04/24

实验原理关于G-带形成的机理，到目前为止还没有*定论，但有人提出了以蛋白质构象改变为基础的显带机理。此机理认为，带纹所反映的是蛋白质结构的差异，这种差异与DNA的功能活动相适应。G-带的形成与Giemsa染料的组成及染色特性分不开。Giemsa染料是由亚甲蓝(美蓝)、天蓝和曙红组成的复合染料，除曙红外，均为噻臻类染料，它只与DNA中的PO43-基结合而不与蛋白质结合，所以染色体着色首先是两个噻臻分子与DNA的结合，在此基础上结合一个曙红分子;形成2:1噻臻-曙红沉淀物。其次要有一个有助于染料沉淀

管式离心机工作原理2017/04/14

管式离心机物料由底部进液口射入高速旋转的转鼓，全钢制结构，双层钢板防护,转鼓上部是挠性主轴调整旋转后形成强大的离心力场，使料液沿转鼓内壁向上流动，管式离心机的实际生产能力视分离介质和分离效果而定。样品在与空气高速旋转摩擦产生的温度上升的幅度是很小的,离心力场的作用下密度较大的固体微粒逐渐沉积在转鼓内壁形成沉渣层。电动机通过传送带：比重大的液相形成外环，高速管式离心机流动到转鼓上部从各自的排液口排出，微量固体沉积在转鼓壁上，速度模式可选RPM或者g（RCF）。介质腐蚀性强等物料的提取、浓缩、澄清较