植物细胞骨架的观察

细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。本试验采用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。 

三、实验用品 
(一)材料 洋葱 
（二）器材 显微镜、载玻片、滴管、擦镜纸、PH 计 
（三）试剂 
1. 0.01mol/L 磷酸盐缓冲生理盐水(PBS) 
0.2mol/L Na2HPO4- NaH2PO4缓冲液（PB，PH7.3） 50ml 
0.15mol/L NaCl 
双蒸馏水加至1000ml 
2. PB 
0.2mol/L Na2HPO4 77ml 
0.2mol/L NaH2PO4 23ml 
3. M-缓冲液 
咪唑(PH 6.7) 50mmol/L 
KCl 50mmol/L 
MgC12 0.5mmol/L 
EGTA 1mmol/L 
EDTA 0.1mmol/L 
巯基乙醇 1mmol/L 
甘油 4mmol/L 
用1mol/L HCl 调pH 至7.2。 
4. 1%的Triton X-100/M-缓冲液 
5. 0.2%考马斯亮蓝R250 染液 
甲醇 46.5ml 
冰醋酸 7ml 
蒸馏水 46.5ml 
6. 3%戊二醛- PB 溶液（PH7.3） 

四、实验操作见图4-4

五、实验建议
1. 用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理材料时，应控制在30min 左右。
2. 每一次加液或染色后，应用PBS 洗2 次，并用滤纸吸干