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上海北诺生物科技有限公司
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02
2013年
08月 -
标签：区域特异性诱变可在长达3‘的克隆化DN段上产生大量的随机分布的核苷酸替换突变，在将DNA克隆到一个可用来分离单链DNA的载体后，用各种可造成特定碱基损伤的化学试剂处理。实验方法基本方案实验材料DNA试剂、试剂盒乙酸钠亚硝酸钠TE无水乙醇dNTP反转录酶RNA酶洗脱液溴化乙锭仪器、耗材水浴锅培养箱实验步骤1.用限制性内切核酸酶消化DNA以获得目的DN段，将靶片段双向克隆到M13噬菌体载体或含有M13复制起始子的质粒载体中。从100ml感染细抱培养物中提取单链DNA。2.在三个微量离心管内各加【查看全文】
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02
2013年
08月 -
一、原理SNP（SingleNucleotidePolymorphism）即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性（Polymorphism）。据估计，在人类基因组中，大约每千个碱基中有一个SNP，无论是比较于限制性片段长度多态性（RFLP）分析还是微卫星标记（STR），都要广泛得多。SNP是我们考察遗传变异的zui小单位,据估计，人类的所有群体中大约存在一千万个SNP位点。一般认为，相邻的SNPs倾向于一起遗传给后代。于是，我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的SNP等位【查看全文】
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02
2013年
08月 -
一、材料、试剂和仪器1、材料：植物总RNA5-10μg2、试剂：1）加样运载缓冲液（Loadingbuffer）50%甘油1mmol/LEDTA（pH8.0）0.25%溴酚蓝25%二甲苯氰FF2）10×TAEBuffer3）5×甲醛凝胶电泳缓冲液：0.1mol/LMOPs（pH7.0）40mmol/L乙酸钠5mmol/LDETA（pH8.0）4）甲醛，甲酰胺3、仪器：电泳装置，紫外透射观测仪二、实验程序1、甲醛变性的琼脂糖（Agarose）凝胶的配制在250mL的锥形瓶中准确称量2gAgaros【查看全文】
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27
2013年
07月 -
多药抗药基因的表达实验标签：抗药基因多药抗药基因的表达实验是通过反转录和PCR的方法来检测特定基因的过度表达。实验方法PCR扩增法实验方法原理大多MDR细胞膜上出现MDR-1基因及其基因产物P-糖蛋白过度表达。实验材料RNA试剂、试剂盒PBS氯仿异丙醇萘酸异硫氰酸肽十二烷基肌酸钠构橼酸钠乙酸钠二疏基乙醇乙醇Taq酶仪器、耗材离心机紫外分光光度计琼脂糖凝胶电泳PCR仪实验步骤一、细胞总RNA提取1.收集约5×107个细胞，冷PBS洗涤。2.加入400ulRNA提取液（含6mol/l的异硫氰酸肽，0【查看全文】
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27
2013年
07月 -
一、碱变性法提取质粒DNA质粒（Plasmid）是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。带有遗传信息，可赋予细菌某些新的表型。将质粒指纹图谱分析方法、质粒DNA探针技术及检测质粒的PCR技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。质粒作为载体在基因工程中起着重要的作用。分离和纯化质粒DNA的方法很多，但这些方法基本包括三个步骤：即细菌的培养和质粒DNA的扩增，细菌菌体的裂解；质粒DNA的提取与纯化。本实验学习用碱变性方法提取质粒DNA。原理细菌培养物加入SDS和NaOH碱性溶液处【查看全文】
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27
2013年
07月 -
一.实验目的及背景高等动物，高等植物的基因组相当庞大，如人类细胞基因组由30亿个碱基对组成，果蝇基因组有1.4×108个碱基对，水稻基因组有1.4×109个碱基对。真核细胞基因组中，约1万－1.5万个可表达的结构基因，其它大量存在的是调控序列和内含子序列。可以说某特定物种的基因组，包含了该物种生长，发育，繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量，因而对真核细胞基因组的结构，组成，以及表达调控的研究是至关重要的，而研究的起点就是要获得纯度高--不含蛋白质、糖类、酚、氯仿等污染；得率好--以便有足够量用于【查看全文】
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22
2013年
07月 -
本文先讲zui简单的一个点的定点突变技术，其它较长片段的突变，删除，插入技术以后会慢慢奉上：在做实验之前，我们首先要搞清楚实验的目的和实验的原理。实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做：*我们吊出来的基因有点突变，相信这可能是大家经常会遇到的问题。基因好不容易吊出来，并装进了自己的载体，却发现有一两个碱基跟自己的预期序列或所有的公共数据库不匹配，然后暴昏。大家实验室里面还是用Taq酶为主吧，Pfu这样的高保真酶大家【查看全文】
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22
2013年
07月 -
血基因组DNA提取可以：（1）从冻全血、血浆、血清、骨髓、其他体液、淋巴细胞、培养细胞、病毒和线粒体中提取DNA；（2）用于后续测序、遗传信息学等研究。实验方法血基因组DNA试剂盒提取法血基因组DNA大量试剂盒提取法血基因组DNA中量试剂盒提取法实验方法原理本试剂盒采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液（包括蛋白酶K裂解）从抗凝全血中得到基因组DNA。适用于从冻全血、血浆、血清、骨髓、其他体液、淋巴细胞、培养细胞、病毒和线粒体中提取DNA。实验材料抗凝全血试剂、试剂盒血基因组DNA试剂盒仪器、耗材96孔【查看全文】
