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上海北诺生物科技有限公司
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06
2013年
08月 -
一、原理非显带染色体除可根据形态分辨部分染色体，其他多数染色体难以确认，而显带技术则可使染色体纵向长度上出现不同带纹，以辨认全部染色体。GTG即G带，Trypsin（胰酶），Giemsa的简写。Giemsa染料是噻嗪——曙红染料，染色体的着色有赖于在原位形成噻嗪--曙红（2∶1）的沉淀物。着色首先取决于二个噻嗪分子同DNA结合，在此基础上再结合一个曙红分子，其次取决于一个疏水环境，以利于染料沉淀而着色。通过胰酶的显带预处理可除去阴性G带区的疏水蛋白，或使它们的结构变成更疏水状态。由此可知，在G显【查看全文】
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06
2013年
08月 -
1．确定抗生素作用的*浓度：不同的细胞株对各种抗生素有不同的敏感性，因此在筛选前要做预试验，确定抗生素对所选择细胞的zui低作用浓度。①提前24小时在96孔板或24孔板中接种细胞8孔，接种量以第二天长成25%单层为宜，置CO2孵箱中37℃培养。②将培养液换成含抗生素的培养基，抗生素浓度按梯度递增0,（50,100,200,400,600,800和1000μg/ml）。③培养10-14天以绝大部分细胞死亡浓度为准,一般为400-800μg/ml，筛选稳定表达克隆时可比该浓度适当提高一个级别维持时使【查看全文】
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06
2013年
08月 -
1.加入1/10体积的乙酸钠（3mol/L，PH=5.2）于DNA溶液中充分混匀，使其zui终浓度为0.3mol/L；2.加入2倍体积用冰预冷的乙醇混合后再次充分混匀置于-20℃中15~30分钟；3.12,000g离心10分钟，小心移出上清液，吸去管壁上所有的液滴；4.加入1/2离心管容量的70％乙醇，12000g离心2分钟，小心移出上清液，吸去管壁上所有的液滴；5.于室温下将开盖的EP管的置于实验桌上以使残留的液体挥发至干；6.加适量的ddH2O溶解DNA沉淀。【查看全文】
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06
2013年
08月 -
实验题目：目的基因的亚克隆一、实验目的1、掌握细菌基因组提取的方法和原理。2、掌握限制性核酸内切酶处理基因组及其结果分析。3、掌握基因片段回收的方法。二、实验原理细菌基因组的提取：通过碱法或者酶法裂解细菌之后，可以将胞内的核酸和蛋白质全释放出来。DNA溶于1mol/L的NaCl中，不溶于0.14mol/L的NaCl，而RNA溶于0.14mol/L的NaCl不溶于1mol/L的NaCl中，通过溶液中盐浓度的变化可以将DNA和RNA分开。氯仿－异戊醇法除去蛋白，2倍体积乙醇将DNA沉淀出来。限制性核【查看全文】
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06
2013年
08月 -
方法一A液：1M，MnCl2：B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌；C液称取CaCl20.10g，KCl1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅121℃高压灭菌备用。取1管B液（0.6ml），全部加入C液（46ml）中，混匀后，再用1ml移液器加入3.3mlA液，混匀冰浴即可使用。划线得到单菌落，37℃培养箱培养约17小时，挑取2-4个形态饱满的单菌落接种于装有100mlS【查看全文】
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06
2013年
08月 -
DNA实验技术：质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。质粒的分离与提取是Z常用、Z基本的实验技术。
测定DNA的核苷酸序列是分析基因结构与功能关系的前提。从小片段重叠法到加减法、双脱氧链终止法、化学降解法、自动测序，DNA测序技术发展很快。目前在实验室手工测序常用Sanger双脱氧链终止法。Sanger法就是使用DNA聚合酶和双脱氧链终止物测定DNA核苷酸序列的方法。它要求使用一种单链的DNA模板或经变性的双链DNA模板和一种恰当的DNA合成引物。其基本原理是DNA聚合酶利用单链的DNA模板，合成出准确互补链，在合成时，某种dNTP换成了ddNTP，这时，DNA聚合酶利用2’，3’-双脱氧核苷【查看全文】
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06
2013年
08月 -
质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。质粒的分离与提取是zui常用、zui基本的实验技术。质粒的提取方法很多，大多包括3个主要步骤：细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒DNA的分离和纯化。本实验以碱裂解法为例，介绍质粒的抽提过程。实验目的：掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试剂的作用。实验材料：含有质粒pUC18载体的大肠杆菌菌液，克隆有水稻外源片段的BAC的大肠杆菌菌液。实验原理：在pH12.0~12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开【查看全文】
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02
2013年
08月 -
标签：DNA重组限制性内切酶酶切连接连接酶利用限制性核酸内切酶切割DNA和利用DNA连接酶连接DNA是DNA重组过程中的关键步骤之一。成功的酶切和有效的连接为后续的外源基因进入宿主细胞进行表达提供了有效的实验材料。实验方法质粒DNA酶切DNA段连接实验方法原理限制性内切酶能够特异性地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异性位点上，并切割双链DNA。实验材料标准pUC19（2686bp）试剂、试剂盒EcoRI及其配套的酶切缓冲液0.5×TBE电泳缓冲液6×LoadingBu【查看全文】
