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上海宝叶生物科技有限公司
中级会员·6年
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08
2013年
01月 -
①胶体金溶液可以重复制备，其颗粒大小可以控制，可较容易进行免疫电镜的双重或多重标记；②金标探针有很高的电子密度，有特殊的分辨率，定位准确；③金标探针能发射二次电子和反射电子，是扫描电镜目前的标记物；④金标探针与组织细胞内的抗原结合后，可用银增强，大大提高了IHC的敏感性，是目前zui为敏感的IHC方法之一；⑤免疫金银染色方法无致癌性，使用较安全。胶体金技术是以胶体金作为一种标记物。胶体金是指金的水溶胶，它具有一般溶胶的特性。溶胶是指一种物质以或大或小的微小粒子分散在另一种物质中所形成的体系。被分【查看全文】
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08
2013年
01月 -
（一）胶体金的颜色溶胶的颜色取决于分散相物质的颜色、分散相物质的分散度和入射光线的种类，是散射光线还是透射光，粒子越小，分散度越高，则散射光的波长越短。对同一种物质的水溶胶来说，粒子大小不同，呈现的颜色亦不同。如胶体金颗粒在5～20nm之间，吸收波长520nm，呈红色的葡萄酒色；20～40nm之间的金溶胶主要吸收波长530nm的绿色光，溶液呈深红色；60nm的胶体金溶胶主要吸收波长600nm的橙黄色光，溶液呈蓝紫色。一般应用于免疫组织化学的胶体金颗粒为5～60nm范围内，溶液呈现红色。在相当的一【查看全文】
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06
2013年
01月 -
[方法]1．建立以下连接反应：●载体DNA（pG6AppG6B，pG6C）（10ug）xul●cDNA片段（3～5ug）yul●10×连接缓冲液40ul●T4DNA连接酶（6WeissU/ul）5ul●水400ul2．在16℃过夜孵育。3．在70℃孵育30分钟，使T4DNA连接酶变性。4．加1体积的乙醇并振荡45秒，在14000g微离心机中离心10分钟，然后将上清液转移到另一新的微离心管中。5．加1体积的24/1（体积比）氯仿/异戊醇并振荡45秒，在14000g微离心机中离心5分钟，然后将上清液【查看全文】
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06
2013年
01月 -
[方法]1．加2～3ul纯化的连接反应物（zui大值为0.3ugDNA）到80ul的*0F’电转化感受态细胞中，轻轻摇晃混合。使用30ng（2ul）的pUCl9控制电转化效率。2．将细胞+DNA悬浮液转移到已冷却的0．2cm细胞电转化管，并冰浴3分钟。3，将GenePulserPlus电穿孔仪设置为2．5kV脉冲，电容器设为25uF，脉冲控制器设为200ns。4．用纸巾干燥电转化管，然后将它放在电转化箱中，使用一个脉冲（寄存时间常量必须为4．5～5．0毫秒）。5．立即加lmlLB到电击管中，打散【查看全文】
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04
2013年
01月 -
[方法]1．将克隆体接种到100ulLBAT96孔培养板上，并在37℃过夜振荡培养（180r/min）。2．使用96孔复制板将其接种到装有200ulLBAT的第二块96孔培养板上，在37℃培养直到生长中期（大约1，5小时）。3．在每一孔中加入10ul2×1011TU/mlR408辅助噬菌体。4．37℃无振荡培养30分钟。5．37℃过夜振荡培养。6．4℃800g离心20分钟，收集细胞。7．将上清液转移到一新的96孔培养板上，并加40pulPEG/NaCl。8．将板放置于冰上1小时。9．4℃800g【查看全文】
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04
2013年
01月 -
[方法]1．用200ulPBST冲洗链霉素包被的微量浓度测定板的每个孔3次。2．在2mol/LPBS中稀释生物素配体（BAS噬菌体—ELISA）或生物素捕获抗体（ISA噬菌体—ELISA），直到终浓度为10—50nmol/l，再加100ul这种溶液到农度测定板中的每个孔中。3．在室温下孵育浓度测定板1小时。4。用200ulPBST冲洗每个孔5次。5．在2mol/LPBS中稀释噬菌体溶液到浓度为1×1011TU/ml，在*次用来稀释IAS融合噬菌体的2mol/LPBS中加入诱饵血清或预免疫血清，再【查看全文】
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29
2012年
12月 -
用scFv接头PCR装配VH和VL进行scFv基因文库的构建
[方法]1．在0．5ml微量离心管内配制以下PCR反应混合液。配制成2个“反应管”，1个含有V。文库DNA，另1个则含有Vl文库DNA。反应管对照1对照2●scFV接头DNA（100ng/ul）1．0ul1．0ul●VH文库DNA（100ng/ul）3．5ul1．0ul●V-文库DNA（Vκ或Vλ）（100ng/ul）3．0ul1．0ul●水6．5ul5．5ul2．在每管中加入：●水，33ul●10×Vent缓冲液，5．0ul●20×dNTP，2．5ul3．在热循环仪格内加热反应管到94℃，5分【查看全文】
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29
2012年
12月 -
[方法]1．在0．5ml微量离心管中，配制两个50/z1PCR反应混合液（1个用于VH—VκscFv文库，另1个用于Vu—VλscFv文库），其中含有：●水，36．5//1●10XTag缓冲液，5．0ul●20XdNTP，2．5ul●正向引物，2．0ul●反向引物，2．0ul●scFv基因文库（约long），1．0ul2．在热循环仪格内加热反应管到94℃，5分钟。如果没有加热盖，则滴加1滴轻质矿物油覆盖反应液。3．加入1．0ul（5单位）TdQDNA聚合酶。4．以94℃1分钟、55℃1分钟、72【查看全文】
