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上海宝叶生物科技有限公司
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再扩增scFv基因文库以添加限制性位点进行克隆
2012-12-29 阅读(1094)
[方法]
1．在0．5ml微量离心管中，配制两个50/z1PCR反应混合液（1个用于VH—VκscFv文库， 另1个用于Vu—Vλ scFv文库），其中含有：
● 水，36．5//1
● 10XTag缓冲液，5．0ul
● 20XdNTP， 2．5ul
● 正向引物，2．0ul
● 反向引物，2．0ul
● scFv基因文库（约long）， 1．0ul
2．在热循环仪格内加热反应管到94℃，5分钟。如果没有加热盖，则滴加1滴轻质矿物油覆盖反应液。
3．加入1．0ul（5单位）TdQDNA聚合酶。
4．以94℃ 1分钟、55℃ 1分钟、72℃ 1分钟的条件共循环25次，扩增scFv基因。
5．用Wizard PCR纯化试剂盒，纯化PCR产物。
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