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乳铁蛋白测定新标准出炉！迪马科技GB 5009.299-2024 最新解决方案发布
检测样品：牛奶检测项目：乳铁蛋白
方案概述：迪马科技参考《GB5009.299-2024食品安全国家标准食品中乳铁蛋白的测定》，使用磷酸盐缓冲液提取试样中的牛乳铁蛋白，肝素免疫亲和柱ProElutHPIAC富集净化，反相高效液相色谱柱Bio-BondC4300Å色谱柱分离检测，回收率在85%-100%之间。
乳铁蛋白因具有抗菌，抗氧化，抗癌，促进肠道发育，促进铁吸收，以及调节免疫系统等功能，故在乳制品及相关食品生产中均有不同程度的添加。2024年2月8日，国家卫生健康委、市场监管总局联合印发2024年第1号公告，发布47项新食品安全国家标准和6项修改单。其中包含《GB 5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定》。
迪马科技参考《GB 5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定》，使用磷酸盐缓冲液提取试样中的牛乳铁蛋白，肝素免疫亲和柱ProElut® HP IAC富集净化，反相高效液相色谱柱Bio-Bond® C4 300Å色谱柱分离检测，回收率在85%-100%之间。
本方案适用食品中牛乳铁蛋白的测定。
(1)磷酸盐缓冲液Ⅰ：称取 30.08g十二水合磷酸氢二钠，2.50g二水合磷酸二氢钠，加入800mL去离子水溶解，再加入20mL乳铁蛋白提取剂*，用纯水定容至1L，混匀。
(2) 磷酸盐缓冲液Ⅱ：称取15.04g十二水合磷酸氢二钠，1.25g二水合磷酸二氢钠，5.84g氯化钠，加适量水溶解，定容至1L，混匀。
(3) 洗脱溶液：称取7.1g十二水合磷酸氢二钠，58.4g氯化钠，用适量水溶解，并定容至1L。
*乳铁蛋白提取剂随货(肝素免疫亲和柱ProElut® HP IAC)附赠，可有效增加提取效率和净化效率。
称取5g样品到50mL离心管中，加入25mL磷酸盐缓冲液Ⅰ，漩涡振荡5min，然后在4℃，10000r/min条件下离心15min，去除上层奶脂用大量程移液器取出中间层10mL作为上样液待净化。
ProElut® HP IAC 6mL 20/pk (Cat.#: 67117)
(1)活化：将10mL注射器连接于亲和柱上端，放掉柱管保护液，取5mL磷酸盐缓冲液Ⅱ活化亲和柱；
(2)上样：取提取样液10mL过柱净化(控制流速1-3mL/min)，弃去流出液；
(3)淋洗：溶液全部过柱后，加入10mL磷酸盐缓冲溶液Ⅱ淋洗，甩干柱内水分；
(4)洗脱：加入4mL洗脱溶液进行洗脱并收集，洗脱液混匀过0.22μm水系滤膜，待液相色谱检测。
色谱柱：Bio-Bond® 5μm C4, 250x4.6mm (Cat.#: 84406)
流速：1.0mL/min
进样量：50μL
柱温：30℃
检测器：PDA 280nm
流动相：A:乙腈 B:0.1%三氟乙酸水溶液
梯度设置：
(1) 肝素亲和柱随货附赠了乳铁蛋白提取剂，有效增加了提取效率和净化效率。
(2) 液体牛奶样品在50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg添加浓度水平上的回收率均大于85%，回收验证合格。
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