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糜蛋bai酶（Chymotrypsin）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

糜蛋bai酶Chymotrypsin试剂盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

糜蛋bai酶，又称胰凝乳dan白酶，是胰腺分泌的一种蛋白水解酶，能迅速分解变性蛋白质。糜蛋bai酶的功能与胰蛋bai酶相似，但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临床上糜蛋bai酶用于痰液稀化，对脓性和非脓性痰液均有效；也用于创伤或手术后伤口愈合，如白内障摘除。

测定原理：

糜蛋bai酶催化ATEE水解，产物在 237 nm 有特征光吸收；通过测定 237 nm 光吸收增加速率，来计算糜蛋bai酶活性。

组成：

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 50 ml 蒸馏水充分溶解。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液。

测定步骤：

分光光度计预热 30min，调节波长到 237 nm，蒸馏水调零。

试剂二置于 37℃水浴中保温 30min。

空白管：取 1mL 石英比色皿，加入 100μL 试剂一，1000μL 试剂二，混匀于 237nm 测定 4min 内吸光值变化，记为△A 空白管。（从吸光值稳定增加开始计时）

测定管：取 1mL 石英比色皿，加入 100μL 粗酶液，1000μL 试剂二，混匀于 237nm 测定 4min 内吸光值变化，记为△A 测定管。（从吸光值稳定增加开始计时）

注意：空白管只需要测定一次。

糜蛋bai酶活性计算公式：

按照蛋白浓度计算

活性单位定义：25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加 1 为一个酶活单位。糜蛋bai酶（U/mg prot）= (△A 测定管－△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V1)÷T=2.75×(△A 测定管－△A 空白管)÷Cpr

Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/ml），需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（ml），100μl=0.1 ml； V 反总：反应总体积，1100μl=1.1ml；T：反应时间（min），4min。

按照样本质量计算

活性单位定义：25℃每克样品每分钟催化吸光值增加 1 为一个酶活单位。糜蛋bai酶（U/g 鲜重）=(△A 测定管－△A 空白管) ×V 反总÷(W×V1÷V2)÷T=2.75×(△A 测定管－△A 空白管)÷W

W：样品质量（g）；V1：加入反应体系中粗酶液体积（ml），100μl=0.1 ml；V2：粗酶液总体积（ml）， 1 ml；V 反总：反应总体积，1100μl=1.1ml；T：反应时间（min），4min。

注意事项：

临用前配制的试剂配置好后 3 天内使用完毕。

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