胃蛋bai酶Pepsin试剂盒 返回列表页

胃蛋bai酶（Pepsin）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样

胃蛋bai酶Pepsin试剂盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

胃蛋bai酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋bai酶分泌的减少。

测定原理：

胃蛋bai酶可催化血红蛋白水解，水解产物与福林试剂反应后显蓝色；一定范围内，其颜色的深浅与胃蛋bai酶活性呈正比。

组成：

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 25 ml 试剂二充分溶解。试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 25 ml 蒸馏水充分溶解。

试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 30 ml 蒸馏水充分溶解。

标准品：液体 1.26ml×1 支，0.5 μ mol/ml 酪an酸标准溶液浓度 4℃保存。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液。

测定步骤：

分光光度计预热 30min，调节波长到 580 nm，蒸馏水调零。

试剂三和试剂四置于 37℃水浴预热 30min。

标准管：取玻璃比色皿，加入 100μL 标准品，200μL 试剂二，600μL 试剂五，100μL 试剂六，混匀后室温静置 20min，于 580 nm 测光吸收，记为 A 标准管。

空白管：取玻璃比色皿，加入 100μL 蒸馏水，200μL 试剂二，600μL 试剂五，100μL 试剂六，混匀后室温静置 20min，于 580 nm 测光吸收，记为 A 空白管。

对照管：取EP 管，加入 500 μL 蒸馏水，置于 37℃水浴保温 10min；加入 500μL 试剂四，盖紧后摇匀1min；加入 100μL 粗酶液，混匀后 8000g 4℃离心 10 分钟取上清；在玻璃比色皿中加入上清液 100μL，再加入 200μL 试剂二，600μL 试剂五，100μL 试剂六，混匀后室温静置 20min，于 580 nm 测光吸收，记为A对照管。

测定管：取EP 管，加入 100μL 粗酶液，500 μL 试剂三，置于 37℃水浴保温 10min；加入 500μL 试剂四，盖紧后摇匀 1min；8000g 4℃离心 10 分钟取上清；在玻璃比色皿中加入上清液 100μL，再加入 200μL试剂二，600μL 试剂五，100μL 试剂六，混匀后室温静置 20min，于 580 nm 测光吸收，记为 A 测定管。

注意：空白管和标准管只需要测定一次。

计算公式：

(1) 按照蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1nmol 酪an酸为 1 个酶活单位。

胃蛋bai酶活性（nmol/min/mg prot）=C 标准品×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）×稀释倍数÷（Cpr×V1）÷T=5500×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）÷Cpr

C 标准品：标准品浓度，0.5 μ mol/ml 酪an酸；稀释倍数：（100+500+500）÷100=11；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/ml），需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（ml），100μl=0.1 ml；T：催化反应时间（min），10min。

（2）按照样本质量计算

活性单位定义：37℃每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1nmol 酪an酸为 1 个酶活单位。

胃蛋bai酶活性（nmol/min/g 鲜重）=C 标准品×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）×稀释倍数÷（W×V1÷V2）÷T=5500×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）÷W

C 标准品：标准品浓度，0.5 μ mol/ml 酪an酸；稀释倍数：（100+500+500）÷100=11；W：组织质量（g）； V1：加入反应体系中粗酶液体积（ml），100μl= 0.1 ml；V2：粗酶液总体积（ml），1ml；T：催化反应 时间（min），10min。

注意事项:

试剂三、试剂四、试剂五临用前配制，配制好用不完的试剂 4℃可保存一周。