胰蛋bai酶试剂盒 返回列表页

胰蛋bai酶（Trypsin）试剂盒说明书

分光光度法 50 管 48 样

胰蛋bai酶试剂盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

胰蛋bai酶选择性水解变性蛋白质中由赖氨酸或精an酸的羧基所构成的肽链，是一种重要的消化酶。此外，胰蛋bai酶还广泛应用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等的辅助治疗。

测定原理：

胰蛋bai酶催化水解TAME 的酯键，释放出的游离羧基与反应体系中的氢氧化钠发生中和反应，导致溶液的pH 值降低，以苯fen红为指示剂，测定溶液在 555nm 处吸收值的变化，可以快速测得胰蛋bai酶活性数据。胰蛋bai酶在一定范围内与 555nm 处吸收值的降低呈良好的线性关系。

组成：

自备仪器和用品：

紫外可见分光光度计、1ml 玻璃比色皿、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

1、组织样品：

按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液）冰浴匀浆，10000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 555nm，蒸馏水调零。

工作液的配制：临用前根据用量按照试剂一（V）：试剂二（V）：蒸馏水（V）：试剂三（V）=1 ml：1 ml：5.4 ml：0.4 ml 的比例充分混合。（注意：现用现配，用多少配多少，在空瓶中配制，试剂盒中带有 4 个空瓶）

3. 吸取25μl样本，加入975 μl工作液，混匀后立即测定，记录555nm下1min时的吸光值A1和2min时的吸光值A2。计算△A=A1-A2

注意：如果△A小于0.005，可将反应时间延长到5min。如果△A大于0.5，体系迅速变色，可将样本用提取液稀释后测定（建议稀释10倍），计算公式中乘以相应稀释倍数。

胰蛋bai酶活性计算公式：

使用石英比色皿测定的计算公式如下

按蛋白浓度计算

活性单位定义：室温下每毫克蛋白质每分钟催化 555nm 处吸光值减少 1 为 1 个酶活单位。胰蛋bai酶（U/mg prot）= △A ×V 反总 ÷（Cpr×V1）÷T

=40×△A ÷Cpr

按样本质量计算

活性单位定义：室温每克组织每分钟催化 555nm 处吸光值减少 1 为 1 个酶活单位。胰蛋bai酶（U/g 鲜重）= △A×V 反总÷（W×V1÷V2）÷T

=40×△A ÷W

Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/ml），需要另外测定；W：组织质量（g）；V1：加入反应体系中粗酶液体积（ml），25 μl=0.025 ml；V2：粗酶液总体积（ml），1 ml；V 反总：反应总体积，1 ml；T：反应时间（min），1 min。

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