N-亚硝胺二甲胺（NDMA）是一种具有N-N=O 结构的化合物，该化合物能与DNA反应使其烷基化，进而致癌。美国FDA曾爆出成品胃药雷尼替丁中含有超过限制含量要求的亚硝胺类致癌物N-亚硝胺二甲胺，FDA 发布公告：召回美国市场上雷尼替丁产品，该公告中提到某些产品中的NDMA 含量会随着时间推移而有所增加，进而可能导致杂质含量高于可接受水平。国内外多家药品生产企业都曾因消化系统药雷尼替丁中检出超限NDMA而启动召回。因此，监管机构以及生产商需要一种分析检测方法，来检测该类药物中的N-亚硝胺二甲胺，切实保障人民用药安全。LC-MS/MS 方法具有高灵敏度、高分辨力、快速分析、结果准确等优势，可降低基质干扰造成的假阴性或假阳性发生可能性，可以满足药品检测较严格的灵敏度、专属性和准确度要求。本文使用谱育科技EXPEC 5210三重四极杆液质联用系统，开发适用于APCI源的LC-MS/MS方法，用于测试和定量雷尼替丁原料胶囊和片剂中的N-亚硝胺二甲胺。

实验部分

标准品、试剂和设备

      标准品：N-亚硝胺二甲胺标准品购自中国食品药品检定院，于-20℃冰箱保存。

      样品：盐酸雷尼替丁胶囊，标号136#、105#、104#、61#、12#

      试剂：甲醇为色谱级，购自默克、甲酸为LC-MS级，购自安谱。  

      仪器：ULC 510超高效液相色谱仪（具体配有二元超高压输液泵、超高压自动进样器、柱温箱）、EXPEC 5210三重四极杆串联质谱仪。

液相和质谱条件

       监测模式为多反应监测(MRM)，NDMA化合物监测离子对、锥孔电压、碰撞能量等参数见下图。

样品前处理

      参考质谱法（中国药典2015年版四部通则0431）测定，具体前处理步骤如下：

      盐酸雷尼替丁胶囊供试品溶液制备：取胶囊内容物适量，相当于雷尼替丁300mg，至50mL离心管中，精密加入甲醇10mL，涡旋混匀1min，再振荡40min，离心，取上清液滤过，取续滤液即得。

实验结果

      线性：精密称取NDMA对照品适量，加甲醇溶解并定量稀释制成1mL中含1、2、5、10、50、100、250、500ng的溶液。按照上述方法依次进样分析，采用外标法拟合后的标准曲线如下图1所示，不同浓度NDMA谱图叠加图如图2所示。

图1 NDMA标准曲线

图2  NDMA色谱叠加图（线性不同浓度）

      灵敏度：精密称取NDMA对照品适量，加甲醇溶解并定量稀释制成1mL中含1ng的溶液，该溶液进样测试色谱主峰的信噪比不低于10。

      稳定性：精密称取NDMA对照品适量，加甲醇溶解并定量稀释制成1mL中含2ng的溶液，重复进样6次，峰面积的RSD值为2.34%，符合所得峰面积的相对标准偏差不得超过10%的要求。

      加标回收率：盐酸雷尼替丁胶囊样品136#中NDMA含量未检出作为空白样品，精密称取300 mg后分别加入不同浓度的标品，按照前处理步骤进行前处理平行处理6个，进样测试后计算回收率。加标后溶液中NDMA浓度分别为：2 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL。

样品测试结果

      盐酸雷尼替丁胶囊按照上述样品前处理和仪器方法，样品平行3次，每个平行样品连续进样2次，最终取平均值作为测试结果，测试结果汇总如下表4所示。

表4 盐酸雷尼替丁胶囊样品中NDMA测试结果汇总表

*ND=Not Detected

图3盐酸雷尼替丁胶囊样品中NDMA测试谱图

结语

      本文使用谱育科技EXPEC 5210 LC-MS/MS对盐酸雷尼替丁胶囊中NDMA含量进行检测，考察方法的线性、灵敏度、稳定性、加标回收率。该方法简单灵敏准确，可以较好地满足盐酸雷尼替丁胶囊中NDMA的检测要求。

      完整报告下载：LC-MSMS法测定盐酸雷尼替丁胶囊中NDMA

• 附录

设备与耗材方案

一、EXPEC 5210 配置详情

二、标准品

• 液相色谱-三重四极杆质谱联用仪

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