士锋生物蛋白质的等电点测定和沉淀反应2013/09/29

一、蛋白质等电点的测定1、目的：了解蛋白质的两性解离性质;学习测定蛋白质等电点的一种方法。2、原理：蛋白质是两性电解质，蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液酸碱度影响。当溶液的PH达到一定的数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动也不向阳极移动，此时溶液的PH值称为此种蛋白的等电点。不同的蛋白质的等电点各不相同。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。3、材料与试剂0.4%酪蛋白醋酸钠溶液200ml（取0.8g酪蛋白，加少量

士锋生物氨基酸的离子交换柱色谱分离2013/09/27

本实验采用磺酸型阳子交换树脂（732型）分离酸性氨基酸（天冬氨酸AsppI=2.97）和硷性氨基酸（赖氨酸LyspI=9.74）的混合液。在pH5.3条件下，因为低于Lys的pI值，Lys可解离成阳离子挂在树脂上；高于Asp的pI值，则Asp可解离为阴离子，不能被树脂吸附而直接流出色谱柱，在pH12条件下，因高于Lys的pI值，Lys又解离为阴离子从树脂上被交换下来，这样通过改变洗脱液的pH值可使它们被分别洗脱而达到分离的目的。【操作】1、树脂的处理关于市售新树脂的处理见注1，关于树脂浮洗的方法

实验室中寡核苷酸探针的类型、优点2013/09/26

常用的寡核苷酸探针有3种：①特定序列的单一寡核苷酸探针；②较短的简并性较高的成套寡核苷酸探针；③较长而简并性较低的成套寡核苷酸探针。多用32P标记寡核苷酸探针，如：1）通过T4噬菌体多核苷酸激酶催化的磷酸化反应标记合成的寡核苷酸探针，在合成寡核苷酸时期5’端缺少一个磷酸基，因而易用T4噬菌体多核苷酸激酶进行磷酸化反应，而将α-32P从[γ-32P]ATP转移至其5’端。这种磷酸化反应zui多能使每一寡核苷酸分子中掺入一个32P原子。2）用大肠杆菌dna聚合酶iKlenow片段标记合成的寡核苷酸探

士锋生物酒精发酵技术2013/09/25

二、原理玉米粉中可供发酵的物质主要是淀粉，而酿酒酵母由于缺乏相应的酶，所以不能直接利用淀粉进行酒精发酵，因此必须对原料进行预处理，通常包括蒸煮（液化）、糖化等处理。蒸煮可使淀粉糊化，并破坏细胞，形成均一的醪液，目前多数厂家开始利用α-淀粉酶的液化作用来替代蒸煮过程，这样可大大减少能源消耗。液化后的醪液能更好地接受糖化酶的作用，并转化为可发酵性糖，以便酵母进行酒精发酵。本实验要求依据前次实验测出的结果，按照α-淀粉酶反应条件的要求对玉米粉原料进行前处理。α-淀粉酶，又称为1,4-α-D-葡聚糖葡萄

士锋生物植物组织培养（plant Tissue Culture）介绍2013/09/23

植物组织培养（plantTissueCulture）是应用无菌培养的方法培养植物的一个离体部分，也即是一种将自然环境中分离出来的植物细胞或组织放入含有合成培养基的瓶中，在无菌条件下使之生长或发育的方法。这项工作自动控制50年代后期至今巳取得了很大的进展，如诱导培养胡萝卜的体细胞分化成完整植株，由曼陀罗的花药培养形成了单倍体的植株。从而证明了植物每个体细胞都有形成整体植物的潜在能力，如植物细胞具有“性”，在离体培养的一定条件下能诱导其分化器官和再生成植株。70年代以后有关植物原生质体培养和体细胞杂

士锋生物植物体内脱落酸、赤霉素的分离和测定2013/09/22

在研究植物生命活动过程中，常常需要准确了解某一激素的含量以及各激素间的比例。因此，植物内源激素的提取分离和测定是植物生理学实验技术中极其重要的内容。本实验以ABA和GA为例，介绍激素的提取、分离及测定的基本原理和方法。一、原理利用脱落酸（abscisicacid，ABA）和赤霉素（gibberellicacid，GA）能溶解于有机溶剂（如丙酮、甲醇）的特性进行提取，将粗提物经过一系列的分离技术（如萃取、薄层层析或纸层析等），使ABA、GA与其它成分分离。再对纯化的ABA和GA进行生物学鉴定或物理

类似生长素对种子影响实验分析2013/09/18

一、原理生长素及人工合成的类似物质如萘乙酸等对植物生长有很大的调节作用，在不同浓度下对植物生长的效应也不同。一般来说，低浓度的生长素促进生长，高浓度时则抑制生长。不同的植物器官对生长素的反应也不同，通常根比芽、茎对生长素更敏感。本实验据此观察不同浓度的萘乙酸在种子萌发过程中对植物不同器官生长的影响。二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦种子。（二）仪器设备：温箱，培养皿，移液管，镊子，滤纸，尺子。（三）试剂：10mg/L萘乙酸，0.1%升汞。三、实验步骤1.取小麦种子，用0.1%升汞消毒15m

士锋生物双向电泳操作步骤2013/09/16

（一）*向等电聚焦1.从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室温溶解。2.在小管中加入0.01gDTT，Bio-Lyte4-6、5-7各2.5ml，充分混匀。3.从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品，充分混匀。4.从冰箱中取-20℃冷冻保存的IPG预制胶条（17cmpH4-7），室温中放置10分钟。5.沿着聚焦盘或水化盘中槽的边缘至左而右线性加入样品。在槽两端各1cm左右不要加样，中间的样品液一定要连贯。注

士锋生物封闭剂小知识总结之封闭剂的种类及选择2013/09/13

封闭的原理：固相载体表面（如ELISA板，NC膜或者PVDF膜上等）有很多洞洞，通过电转或包被，胶上的蛋白被转移到了膜上，或抗原/抗体固定在板上，蛋白以机械填补（堆积）和吸附的方式结合于表面。蛋白塞进了表面的很多洞洞里面，但蛋白并不是连续的，有很多空隙，而且比如说样品孔之间也有空隙，这些洞洞并没有填进东西，而抗体也是蛋白，也会被吸附在空的洞里，这样，就会有很多非特异性的信号。封闭液中的蛋白可以与表面上的空白位置结合，同样以机械填补（堆积）和吸附覆盖的方式结合在膜上，因为有“填补”和“覆盖”蛋白结

士锋生物SDS-PAGE检测外源蛋白的表达实验步骤2013/09/11

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中zui经常使用的一种方法。它是将蛋白样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠（SDS）以及巯基乙醇一起加热，使蛋白变性，多肽链内部的和肽链之间的二硫键被还原，肽链被打开。打开的肽链靠疏水作用与SDS结合而带负电荷，电泳时在电场作用下，肽链在凝胶中向正极迁移。不同的大小的肽链由于在迁移时受到的阻力不同，在迁移过程中逐渐分开，其相对迁移率与分子量的对数间成线形关系。pGLO是将绿色荧光蛋白（GFP）的基因克隆在阿拉伯糖启动子之后的一种表达载体。携带有

士锋生物总蛋白和膜蛋白提取方法2013/09/10

膜蛋白具有多种功能，在细胞识别、细胞信号转导、运输等有着中着重要的角色，因此也是的药物靶点。抽提膜蛋白主要是进行蛋白组分析：常用的实验是非变性胶电泳、酶活分析、SDS-PAGE、westernblot等。本文叙述了总蛋白的抽提方法、和膜蛋白的提取方法。一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法）1、自配裂解液（pH8.5-9.0）：50mMTris-HCl，2mMEDTA,100mMNaCl，0.5%TritonX-100，调pH值至8.5-9.0备用;用前加入100μg/ml溶菌酶，1μl/ml的蛋白

士锋生物Western blot实验和检测大量蛋白方法2013/09/09

这种称为“micro-westernarrays”（微印迹分析，译）的方法能将蛋白检测常用实验：Westernblot的特异识别能力，和DNA芯片检测的高通量能力结合起来，帮助科学家们一次实验就可以观测到细胞中各种蛋白之间的网络系统，节省了每次反复实验的人力和物力。领导这一研究的芝加哥大学癌症生物研究所资深研究员RichardB.Jones表示，“蛋白才是细胞中真正的行使功能的‘仪器’，但是由于这一系统太复杂，所以还没有科学家能深度剖析它们，现在我们终于能利用这一技术分析蛋白了。”自上个世纪70

士锋生物双向电泳溶液配制大全2013/09/04

A.裂解液（lysissolution）（8MUrea,4%CHAPS,2%Pharmalyte3-10,40ml）FinalconcentrationAmountUrea（Fw60.06）8M19.2gCHAPS4%（w/v）1.6gPharmalyte3-102%800μlDoubledistilledH2OTo40ml新鲜配制或者分装贮存于-20℃①如果需要，尿素的浓度可以调高到9或者9.8M，也可用7MUrea，2MThoiurea。②其他的去垢剂（如TritonX-100，NP-40，

士锋生物原核表达实验前分析设计2013/09/02

在下面将列出几个影响表达的因素，大家可以在表达前根据这几个因素自己分析一下：1.翻译起始位点现在大部分的表达载体都提供起始位点，所以它已经把起始密码子与核糖体结合位点的距离进行优化了，一般情况下不需要自己再加，不过还是要留意载体图谱上是否注明有起始密码子和终止密码子2.GC含量表达序列中的GC含量超过70%的时候可能会降低蛋白在大肠杆菌中的表达水平。GC含量可以利用DNASTAR、VectorNTISuite等软件进行预测。3.二级结构在起始密码子附近的mRNA二级结构可能会抑制翻译的起始或者造

大鼠血小板衍生生长因子β（PDGF-β）elisa试剂盒说明书2013/09/01

大鼠血小板衍生生长因子β（PDGF-β）酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠血小板衍生生长因子β（PDGF-β）水平。用纯化的大鼠血小板衍生生长因子β（PDGF-β）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血小板衍生生长因子β（PDGF-β），再与HRP标记的PDGF-β抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪血小板

士锋生物GST融合蛋白的表达与纯化介绍2013/08/30

GST融合蛋白的表达与纯化原理GST纯化系统是利用GST（glutathione-S-transferase）融合蛋白与固定的谷胱甘肽（GSH）通过硫键共价亲和，通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化。1ml树脂大约可结合5-8mg融合蛋白，并可反复使用数次。试剂uIPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）2gIPTG溶解入10ml水，过滤除菌，分装，-20℃保存。uLysisbuffer（50ml）1）2.5ml1MTris，pH8.02）0.1ml0.5mlEDTA3）0.292gNaCl4）0.

士锋生物WEALTEC垂直电泳仪的使用方法2013/08/29

本实验的目的是学习WEALTEC垂直电泳仪基本操作流程，确保垂直电泳仪正常运行。主要内容如下：灌胶、染色与脱色注意事项，详细方法如下：一、灌胶1.把制胶器放在平稳的台面上。2.保持制胶器干燥，抬起两侧的羽状开关放开卡门，平放，放进橡胶垫圈并紧扣。先把厚玻璃平板放入，再放两侧的垫片，后放入带凹型的玻璃平板。3.紧紧合上卡门，同时按压两侧的羽状开关听到“咔嚓”声音。4.倒分离胶：将配好的分离胶溶液用加样枪缓慢加入制胶玻板之间,直至液面达到卡门边框下缘线处。小心用加样枪将去离子水沿水平方向加入制胶板中

士锋生物铁蛋白的蛋白储存功能2013/08/27

铁蛋白是一种常见的球状蛋白，由24个蛋白亚基构成，它能在所有类型的细胞中表达，是原核生物与真核生物zui用于储存铁离子的主要蛋白质。铁蛋白的主要功能是使铁离子的储存维持在溶解状态并且对细胞无害的;对于人类来说，它是一个铁缺乏和铁过载的缓冲区。没有与铁离子的储铁蛋白称为原储铁蛋白（或“去铁铁蛋白”）。铁蛋白是动植物体内广泛存在的一类贮存铁的蛋白。在哺乳类动物的肝和脾中含量zui多。其外径约12～14nm，空囊腔径长约6nm，外壳（即脱铁铁蛋白）由24个亚基组成，每个亚基约含163个氨基酸残基，每个

胶原蛋白原理、功能介绍2013/08/22

胶原蛋白（collagen）是一种生物性高分子物质，是一种白色、不透明、无支链的纤维性蛋白质。它可以补充皮肤各层所需的营养，使皮肤中胶原活性增强，有滋润皮肤，延缓衰老、美容、消皱、养发等功效。根据《肽营养学》（北京大学公共卫生学院营养与食品卫生学系教材）提出，分子量在1000道尔顿以下的胶原蛋白无需分解可被人体直接吸收，在口服吸收及外用护肤方面效果明显。胶原蛋白是人体延缓衰老必须补足的营养物质，占人体全身总蛋白质的30%以上，一个成年人的身体内约有3公斤胶原蛋白。它广泛地存在于人体的皮肤、骨骼、

士锋生物蛋白的裂解与提取方法步骤2013/08/21

这是偶整理的蛋白裂解和提取的protocol，希望对大家有所帮助。10ml三去污裂解液配方如下：50mmol/LTris-cl（pH8.0）：0.07882g150mmol/LNaCl：0.08775g0.2g/L叠氮钠：0.002g1g/LSDS0.01g100mg/LAprotin0.001g10g/LNP-400.1g5g/L去氧胆酸钠0.05g100mg/L苯甲基磺酰氟（PMSF）0.001g总蛋白抽提程序：1.PBS洗细胞3次2.加入裂解缓冲液（1.5x106个细胞大约加入100µL裂