士锋生物双向电泳溶液配制大全

Final concentrationAmountUrea（Fw 60.06）8M19.2gCHAPS4%（w/v）1.6gPharmalyte3-102%800μlDouble distilled H2OTo 40ml

新鲜配制或者分装贮存于-20℃ ① 如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M，也可用 7M Urea，2M Thoiurea。 ②其他的去垢剂（如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂或者双性离子去垢剂）可以取代 CHAPS。 ③如果需要，蛋白质酶的抑制剂和或者还原剂可以加入。

B.水化液 （不含有 IPG buffer, Rehydration stock solution without IPG buffer） （8M Urea, 2% CHAPS, bromophenol blue,25ml）

Final concentrationAmountUrea （FW 60.06）12g12gCHAPS2%（w/v）0.5gBromophenol blue0.002%（w/v）50μlDouble distilled H2OTo 25ml

分装贮存于-20℃ ①DTT和 IPG buffer在用之前加入：每 2.5ml 水化液加 7mg DTT。如果胶内上样，则样品液在用之前加入到 2.5ml的水化液中。 ②如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M。 ③其他的去垢剂（如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂23或者双性离子去垢剂）可以取代 CHAPS。

Final concentrationAmount溴酚蓝储液Bromophenol blue1%100mgTris-base50mM60mgDouble distilled H2OTo 10ml

C. 水化液 （含有 IPG buffer，Rehydration stock solution with IPG buffer） （8M Urea，2% CHAPS，0.5% or 2% IPG buffer，bromophenol blue，25ml）

Final concentrationAmountUrea （FW 60.06）8M12gCHAPS2%（w/v）0.5gIPG buffer（same pH range as the IPG strip）0.5%or 2%（v/v）125 or 500μltd>Bromophenol blue0.002%（w/v）50μl 1% solutionDouble distilled H2OTo 25ml

分装贮存于-20℃ ①DTT和 IPG buffer在用之前加入：每 2.5ml 水化液加 7mg DTT。如果胶内上样，则样品液在用之前加入到 2.5ml的水化液中。 ②IPG buffer 的浓度取决于所用的等电聚焦系统和 IPG胶条的 pH 范围。 ③如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M。 ④其他的去垢剂（如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂或者双性离子去垢剂）可以取代 CHAPS。 ⑤浓度为 0.5%的 IPG buffer用 125μl IPG buffer，浓度为 2%则用 500μl。

D.平衡液（SDS equlibration buffer）（50mM Tris-cl pH8.8, 6M Urea, 30% glycerol, 2% SDS, bromophenol blue, 200ml）

Final concentrationAmount1.5M Tris-cl,pH8.8（see solution F）50mM50mM 6.7mlUrea（Fw 60.06）6M72.07gGlycerol（87% v/v）30%（v/v）69mlSDS（Fw 288.38）2%（w/v）4.0gBromophenol blue0.002%（w/v）400μl 1% solutionDouble distilled H2OTo 200ml

分装 40ml 贮存于-20℃。这是一个贮存液。用之前在加 DTT或者碘乙酰胺。

E.单体贮存液（Monomer stock solution） （30% acrylamide,0.8% N,N!-methylenebisacrylamide,200ml）

Final concentrationAmountAcrylamide（Fw 71.08）30%60.0gN,N`-methylenebisacrylamide（Fw 154.17）0.8%1.6gDouble distilled H2OTo 200ml

用 0.45微米的滤纸过滤。4℃避光保存。

F.4x分离胶溶液（4x Resolving gel buffer）（1.5M Tris-Cl pH8.8, 1000 ml）

Final concentrationAmountTris-base（Fw 121.1）1.5M181.5gDouble distilled H2O750mlHCl（Fw 36.46）Adjust to pH8.8Double distilled H2OTo 1000ml

用 0.45微米的滤纸过滤，4℃保存。

G.10% SDS溶液

Final concentrationAmountSDS（Fw 288.38）10%（v/v）5.0gDouble distilled H2OTo 50 ml

用 0.45微米的滤纸过滤，室温保存。

H.10%过硫酸铵（10% Ammonium persulphate）

Final concentrationAmountAmmonium persulphate（Fw 228.20）10%0.1gDouble distilled H2OTo 1ml

当加入水时，新鲜的过硫酸铵会发出“咔嚓”声音。如果没有声音，则需要换新的药品。用之前配制。