组织细胞RNA提取试剂盒 返回列表页

组织细胞RNA提取试剂盒（异硫氰酸胍提取法）产品货号：11132产品规格：50T/100T产品简介：RNA的种类来源比较多，提取制备的方法各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法，其中常用的是苯酚法，即Trizol法提取RNA。异硫氰酸胍作为强的阴离子表面活性剂，可以有效的解离核蛋白与核酸的复合体，并对RNase产生强烈的抑制作用，保持RNA的完整性。加入氯仿等试剂并离心，上层清液用异丙醇沉淀回收总RNA。组织细胞RNA提取试剂盒(异硫氰酸胍提取法)适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA，既可用于小量样品(50～100mg组织、5×106细胞)，也可用于大量样品(>1g组织、>107细胞)。提取的总RNA质量高，可用于N orthernblot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。本产品具有以下特点：①适用范围广；②操作简单，整个过程90min内完成；③纯度高；④污染少。产品组成：试剂名称 50T 100T 保存条件试剂(A): RNA 提取液 30ml 60ml 4℃，避光试剂(B): 乙酸钠缓冲液 3ml 6ml 室温试剂(C): RNA 分离液 30ml 60ml 4℃，避光试剂(D): RNA 沉淀液 30ml 60ml 室温试剂(E): RNA 洗涤液 50ml 100ml 室温试剂(F): RNase-free ddH2O 10ml 20ml 室温试剂(G): RNA 保存液 10ml 20ml 4℃，避光自备材料：1. 液氮、研钵或匀浆器2. 经 RNase free 处理的移液器吸头、EP 管等耗材3. 低温高速离心机、低温冰箱4. 无菌 PBS 缓冲液操作步骤 (仅供参考) ：1. 实验准备：RNA 分离液室温放置 15min 确保两相分开，无菌 PBS 缓冲液、RNA 提取液和 RNA 沉淀液冰上预冷。2. 样品准备⑴ 贴壁细胞：①直接裂解：直接在培养瓶/皿中加入 RNA 提取液裂解细胞，每 10cm2面积加 1ml，用移液器吹打混匀。②胰蛋白酶消化：用无菌 PBS 洗涤细胞后，加入含有 0.05～0.25 %胰蛋白酶的 PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基终止反应，将细胞溶液转移至无 RNase 的离心管中，以下参考悬浮细胞相关操作步骤。⑵ 悬浮细胞：收集(1~5)×106～107动物、植物和酵母细胞或 107细菌细胞加至 1.5ml 离心管，5000～6000g 离心5min，用无菌 PBS 重悬细胞沉淀，再次 5000～6000g 离心 5min 收集细胞沉淀，去除上清。收集细胞时一定要将溶液去除干净，否则裂解不*，降低 RNA 收获率。向沉淀中加入加入 0.5ml RNA 提取液，充分振荡混匀。⑶ 组织：取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织，50～100mg 组织在液氮中充分研磨或者加入 0.5ml RNA提取液研磨或者用匀浆器匀浆处理。样品体积一般不超过提取液体积的 10%。研磨要迅速，以 1min 为佳。⑷ 血液：取 0.5～1ml 新鲜或冻存的血液，12000g 离心 5min，去除血浆，加入 0.5ml RNA 提取液，充分振荡混匀。3. 核酸分离：将细胞液或匀浆液转移至 1.5ml 离心管，加入 1/10 体积的乙酸钠缓冲液，颠倒混匀 5~6 次。加入RNA 分离液，颠倒混匀 5~6 次后震荡 10-20s，冰上放置 15 min,使核蛋白与核酸*分离。4. 样品分层：12000 g 4℃离心 10～15min。RNA 在上层水相。5. 沉淀 RNA：吸取上层水相(约 0.5ml)转移至新的 1.5ml 离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA 污染)，加入等体积 RNA 沉淀液混匀，冰上放置 10～15 min。12000 g 4℃离心 10min，离心后管侧或管底形成胶状沉淀，弃上清。6. 洗涤 RNA：加入 1ml RNA 洗涤液轻轻洗涤沉淀，冰上放置 5～10min，7500g 4℃离心 5min，弃上清。室温干燥 10～30min，不宜过分干燥，否则 RNA 难以溶解。7. 溶解 RNA：加入 30～50ul RNase-free dd H2O 充分溶解，-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中 RNase 含量高的样品沉淀用 RNA 保存液溶解。注意事项：1. 样品保存：加入 RNA 提取液混匀后，样品可在-70℃放置 1 月；RNA 样品可以在 70 %酒精中-70℃保存 2～4 周：如果需要长期保存，应置于超低温冰箱中保存。2. RNA 提取液和 RNA 分离液含有腐蚀性物质，污染皮肤或眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。有效期：12 个月有效。常温运输，4℃保存。