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SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

产品编号： 10312

产品规格：100-150 次

SDS-PAGE凝胶制备试剂盒产品内容：  

    SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒所提供的 APS（过硫酸铵）为固体粉末，使用前加入超纯水溶解即配制成 10%APS 溶液（1.5 g APS 加 15 ml 纯水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。溶液在使用中可放置 4℃ 保存一个月。

产品简介：

     SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒包括 SDS-PAGE 凝胶制备所需全套试剂，只需自备纯水，即可制备高质量各种浓度的变性 PAGE 凝胶，方 便、快捷。

注意事项：

1. 10%APS 配制后分装-20℃保存。APS 溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防 失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20 度保存的 10%APS。

2. PAGE 凝胶的凝聚速度与温度以及 APS、TEMED 的用量密切相关；在其它条件不变的情况下，可通过改变 APSTEMED 的用量，控制 PAGE 凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作；附表中的 APS 及 TEMED 量可 供参考，应根据实操作情况做适当的调整。

3. 在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

4. 在分离胶上层加纯水时要小心操作，加水时速度不能太快。

5. 丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

6. 本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：

 根据目的蛋白分子量大小选择合适的 PAGE 分离胶配制浓度，适用胶浓度请参考附表 II 灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表 3）

1. 参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。  注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加 入上层筛板可根据实际情况选择。

2. 将不同体积的 30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer、SDS Buffer 和纯水在小烧杯或试管中混合。

3. 加入 10%APS 和 TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4. 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于 mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端 1.5 cm 或距梳齿约 0.5 cm 即 可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层 1 cm 的水层，使凝胶表面保持平整。

5. 静置 30-60 分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

II 灌制浓缩胶（各试剂使用量请参考附表 2）

1. 去除覆盖在分离胶上的水层。

2. 将不同体积的 30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer、SDS Buffer 和纯水在一个小烧杯或试管中混 合。

3. 加入 10%APS 和 TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4. 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。

5. 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

6. 静置 10~20 分钟，等待浓缩胶聚合。

7. 待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。

8. 进行常规电泳操作。

附表 1. SDS-PAGE 分离胶的浓度与适用待测蛋白检测范围

附表 2. 配制 5%SDS-PAGE 浓缩胶

附表 3. 配制 SDS-PAGE 分离胶