细胞、组织核蛋白提取试剂盒 返回列表页

产品名称：细胞、组织核蛋白提取试剂盒

产品货号：26131

操作步骤：

1. 请在蛋白抽提前取出 Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer、Extraction Buffer 进行预冷。

2. 收集细胞于 1.5ml 离心管中，3000rpm 离心去上清。估算所收集细胞体积（Packed Cell Volume，PCV）。 以下步骤以 100μL 细胞体积为例，具体实验可根据细胞数按相应倍数放大。

3. 每 100μL PCV 加 500μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer(含 DTT 及蛋白酶抑制剂)，用 10μL 枪 头轻轻吹匀 20-30 次，避免泡沫。

4. 冰上孵育 15min (每 5min 用 10μL 枪头轻轻吹匀 20 次)，4℃2000 rpm 离心 5min。

5. 用移液器吸弃上清，于沉淀中加入 200μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制 剂)。

a．将沉淀转移至玻璃匀浆器中，冰上匀浆 5-10 次；或 b.用 1ml 注射器（5 号针头）反复吹吸沉淀溶 液 5 次。

  可选步骤：此时可去少量样品用台盼蓝染色液染色，未裂解的活细胞不会被染色，裂解后的可被染色。

6. 4℃12000-14000rpm 离心 20min。

7. 将上清转移至新 1.5ml 离心管中，此上清为细胞质蛋白，沉淀为细胞核。

8. 于沉淀中加入 70μL Extraction Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制剂)，冰上孵育 30min，每隔 5min 轻 轻上下混匀 10 次。

9. 4℃ 12000-16000rpm 离心 10min。 10. 收集上清-20℃保存，此提取液即为细胞核蛋白。

提取：

1. 称取 50mg 组织，将组织块用 PBS 润洗，吸弃 PBS 并转移至匀浆器中。

2. 每 50mg 组织加 500μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制剂)。

3. 冰上匀浆 15-20 次至细胞破碎。

4. 收集匀浆液，4℃ 12000-14000rpm 离心 20min。

5. 将上清转移至新 1.5ml 离心管中，此上清为细胞质蛋白，沉淀为细胞核。

6. 于沉淀中加入 70μL Extraction Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制剂)，冰上孵育 30min，每隔 5min 轻 轻上下混匀 10 次。

7. 4℃ 12000-16000rpm 离心 10min。

8. 收集上清-20℃保存，此提取液即为细胞核蛋白。