真菌基因组DNA提取试剂盒 返回列表页

真菌基因组DNA提取试剂盒 

产品货号：26244

 产品规格：50T/100T

 产品简介：

 真菌基因组DNA提取试剂盒 真菌是具有真核和细胞壁的异养生物，种属很多，已报道的属达1万以上，种超过10万个。真菌通常又分为 三类，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）。对于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠处理，而对于大型真菌，可直接用液氮研磨。经过前期处理的菌液，用硅质膜吸附，即可得到高纯度的基因组。提取纯化后的DNA，可以直接用于PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP等下游应用实验。产品组成：产品组成 50T 100TRNase A 1ml 1ml×2蛋白酶 K 1ml 1ml×2玻璃珠 6g 11g溶液 A 10ml 20ml溶液 B 10ml 20ml漂洗液 15ml 15ml×2洗脱液 10ml 20ml吸附柱 50个 100个收集管 50个 100个

 操作步骤（仅供参考）： 

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

 1. 样品的处理： 

1）对于酵母菌，取1-2ml培养好的菌液，离心收集，弃上清。加入200ul溶液A，加入20ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约5-10min。

 2）霉菌(孢子也可相同处理)：取50-100mg菌丝，加200ul溶液A，用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝，加入20ul RNaseA，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约30min。

 3）大型真菌（如蘑菇等）：称取50-100mg样品，倒入适量的液氮，立即研磨重复3次，使样品研成粉末（如无液氮，可加200ul溶液A后用玻璃研磨器适当研磨），加200ul溶液A，加入20ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约5min。

 2. 加入20ul的蛋白酶K（10mg/ml），充分混匀，55℃水浴消化30min，消化期间可颠倒离心管混匀数次。12000rpm离心2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀，可再次离心。 

3. 在上清中加入200ul溶液B，充分混匀。如出现白色沉淀，可放55℃水浴5min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不*，可能导致提取的DNA量少及不纯，还有可能导致上柱后堵柱子，请增加消化时间。

 4. 再加入200ul无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，放置2分钟。

 5. 12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

 6. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

 7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

 8. 12000rpm离心2min，将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

 9. 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min， 12000rpm离心1min。

 10. 离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心2min，即可得到高质量的基因组DNA。

 注意事项：

1. 由于真菌种类万千，对于一些特别难处理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振荡，蛋白酶K处理，一般都可以得到一定量的基因组DNA，如电泳检测很弱，一般PCR都会有较好结果。

2.  若溶液A或溶液B中有沉淀，可在55℃水浴中重新溶解。

3.  如果DNA提取量很少，可加长玻璃珠处理时间，如果提取DNA成弥散短条带，可减少玻璃珠处理时间

4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率；DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

5.  DNA浓度及纯度检测：得到的基因组片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰， OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml 单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

   保存条件：室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期12个月，2-8℃保存时间更长。