一步法感受态细菌制备试剂盒 返回列表页

一步法感受态细菌制备试剂盒 

产品货号：11127 

产品规格：100T/500T 

产品简介：

一步法感受态细菌制备试剂盒(One Step Competent Cell Preparation Kit) 是一种用于大肠杆菌感受态细菌快速制备的试剂盒。是在经典的TSS法的基础上进行适当改良而成，既继承了TSS法的快速和简便，又在此基础上提高了感受态细菌的转化效率和易操作性。使用本试剂盒可以使感受态效率达到106以上。不仅可以转化质粒，而且可以转化普通的连接产物。另外，对细菌的培养条件要求比较宽松，培养的细菌只要处于对数期内就可以使用本试剂盒制备感受态细菌。使用本试剂盒操作非常简单，细菌培养好后仅需十几分钟就可以完成感受态细菌的制备。本试剂盒适用于绝大部分常见的大肠杆菌，包括DH5α、JM109、TG1、HB101和XL-1等。对于一些用于蛋白表达或病毒质粒构建的特殊大肠杆菌也适用，制备出来的感受态菌转化质粒肯定没有问题，但如果转化连接产物有时效果不如DH5α等其它常见的细菌。本试剂盒提供了DH5α甘油菌作为菌种，可以用于制备感受态细菌。本试剂盒可以分多次使用，共可以制备足够进行200-400次转化的感受态细菌。 

产品组成：试剂名称 100T 500T感受态制备试剂 5ml 25mlDH5α甘油菌 100μl 500μl 

使用说明：

 1. 涂平板： 

为取得最佳的感受态效率，必须先把甘油菌或其它形式保存的菌种涂 LB 平板，并培养过夜。

 2. 接种：

 取一有新鲜培养的菌种的 LB 平板，后续操作均在超净台内进行。把镊子的顶端在 70%酒精中蘸一下，并在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，从平板上挑取一个单克隆，然后把蘸有菌种的塑料枪头或牙签放到装有 3 毫升 LB 的细菌培养试管内。上述操作也可以使用接种环等进行操作。 

3. 培养： 

37℃约 200rpm 培养过夜，通常培养时间控制在 16 小时左右为宜。绝对不宜超过 18 小时。

 4. 再接种培养：

 根据需要制备的感受态细菌的量，按照 1:100 的比例用新鲜培养的过夜菌接种培养。例如取 500 微升的新鲜过夜菌到 50 毫升的 LB 中继续 37℃约 200rpm 培养。通常在大约培养 2-2.5 小时后 OD600 可以达到 0.3-0.5。 

5. 制备感受态细菌： 

在培养的细菌 OD600 达到 0.3-0.5 时，4℃2000g 离心 5 分钟收集细菌。 如果离心沉淀前的菌量为 50 毫升，按后续操作进行，如果是其它体积则按比例换算后进行后续操作。用 5 毫升预冷的 LB 重新悬浮起细菌沉淀，加入 5毫升在冰浴或冰水浴上融解的感受态制备试剂，混匀，冰浴放置 5 分钟。然后再轻轻混匀，根据实验需要适当分装到 1.5 毫升或 0.5 毫升的离心管内后-70℃保存。注：如果以后会只做单管的转化，可以分装成每管最少 50 微升或 100 微升，如果以后一次性做多个转化，可以每管分装 500 微升或更大体积。-70℃保存后，感受态的效率会随时间的推移逐渐下降，但通常在半年内使用转化效率下降不会太多。总的来说，新鲜制备的感受态要比冻存的感受态转化效率更高一些。 

6. 感受态细菌的使用：

 a.对于感受态细菌效率的测定或连接产物的转化(其它如基因突变产物的转化等参考连接产物进行)：

 (a)在冰上缓慢融解感受态细菌(对于新鲜制备的感受态就可以直接使用了)，如果检测感受态细菌的效率，加入100pg-10ng 质粒，但质粒的体积不宜超过感受态细菌量的 10%。如果转化连接产物，每 100 微升感受态细菌加入10 微升连接产物。

 (b)轻轻用手指弹动离心管，以混匀细菌和质粒或连接产物。冰浴或冰水浴放置 30 分钟。

 (c)42℃水浴，热休克 2 分钟。 

(d)热休克后立即置于冰水浴中，2 分钟。 

(e)加入 900 微升 LB，37℃200rpm 培养 1 小时。(f)如果检测感受态效率，取 100 微升涂布到含有相应抗生素的 LB 平板上。如果转化的是连接产物，2000-3000g离心 1 分钟或更长时间使细菌充分沉淀下来。去除约 900-950 微升 LB 培养液。细菌沉淀用余下的 LB 培养液重悬，然后全部涂布到含有适当抗生素的 LB 平板上。37℃培养过夜。 

b.对于质粒的转化：

 (a)融解感受态细菌，加入不少于 50ng 质粒到 50 或 100 微升感受态细菌中。质粒的量可以是 1 微克或更多，但体积不宜超过感受态细菌量的 10%。

 (b)轻轻用手指弹动离心管，以混匀细菌和质粒。冰浴或冰水浴放置 10 分钟。

 (c)取全部菌液直接涂布到含有适当抗生素的 LB 平板上，37℃培养过夜。

 注意事项：

 需自行配制 LB 液体培养基和 LB 平板以用于细菌的培养和感受态效率的检测。尽管经过我们的测试凡是处于对数期内的细菌都可以用于感受态细菌的制备，但如果细菌生长的 OD600 的值达到 0.3-0.5 左右时，制备出来的感受态效果较佳。在制备感受态细菌的过程中均使用不含抗生素的 LB。在使用感受态菌的过程中热休克后的 37℃培养时也必须使用无抗生素的 LB，即便转入的质粒是有抗性的。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 有效期：-20℃保存，一年有效。