粪便基因组DNA提取试剂盒 返回列表页

粪便基因组DNA提取试剂盒

产品货号：26225

产品规格：50T/100T

产品简介：

本试剂盒适用于各类粪便样本的基因组DNA提取。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司*新型材料，配合本公司*的缓冲液配方可有效去除动物粪便中各种影响下游实验的抑制因子，并能高效地回收粪便中的基因组DNA。提取的DNA纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种下游应用实验，如酶切、PCR、文库构建等。

产品组成：类别 试剂名称 50T 100TPart I Proteinase K (20 mg/mL) 1mL 1mL×2Part II缓冲液 AC 5mL 10mL裂解液 LB 70mL 140mL杂质去除剂 5mL 10mL去蛋白液 PL 25mL 50mL结合液 BD 11mL 22mL漂洗液 W 13mL 26mL洗脱液 10mL 20mLDNA 吸附柱 S2 50 个 100 个2mL 收集管 50 个 100 个

实验前准备：

1. 自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，1.5mL 离心管，无水乙醇等。

2. 所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到 12,000 rpm 转速的传统台式离心机。

3. 使用前，在漂洗液 W 瓶中加入 4 倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。如果发现漂洗液W 由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入 4 倍体积的无水乙醇。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持漂洗液 W 中的乙醇含量。操作步骤：

一、样本预处理：

1. 取约 200mg 粪便，转移至 2mL 离心管中，并置于冰上。

2. 加入 1.4 mL 裂解液 LB，涡旋振荡 1min，*混匀。注：若粪便样本为冰冻样本，加入裂解液 LB 前，不宜解冻。注：为保证*混匀，可适当延长涡旋振荡时间。

3. 70℃水浴或金属浴 5min。

注：针对含革兰氏阳性菌等较难裂解的粪便样本，可提高温度至 95℃。

4. 振荡混匀 15sec，室温放置 1min。12,000rpm 离心 1min 沉淀粪便颗粒。转移 900μL 上清液，至 1.5 mL 离心管中。

5. 加入 100μL 杂质去除剂，立即涡旋振荡至*混匀。室温放置 1min，12,000rpm 离心 3min，去除杂质。

6. 转移上清至 1.5mL 离心管中，12,000rpm 离心 3min。

7. 取步骤 6 中的 210μL 上清液至 1.5mL 离心管中，加入 20μL Proteinase K (20mg/mL)，充分混匀。8. 加入 200μL 结合液 BD，立刻振荡混匀，70℃水浴或金属浴 10min。

注：为获取更高产量，可以转移更多上清液，同时按比例增加 Proteinase K (20mg/mL)、结合液 BD 及后续异丙醇用量。

二、DNA 提取：

1. 将 DNA 吸附柱 S2 套入 2mL 收集管中，备用。

2. 加入 100μL 缓冲液 AC 至 DNA 吸附柱 S2 中，12,000rpm 离心 1min，弃掉废液。

3. 加入 100μL 异丙醇（自备）至上述预冷后的样本预处理混合液中，立即振荡混匀，短暂离心收集管盖内的液体。注：可能会形成絮状沉淀，属于正常现象。

4. 将上述混合物加入 DNA 吸附柱 S2 中，12,000rpm 离心 1min，弃掉废液。

5. 加入 500μL 去蛋白液 PL，12,000rpm 离心 30sec，弃掉废液。

6. 将 DNA 吸附柱 S2 放回收集管中，加入 600µL 漂洗液 W，12,000rpm 离心 30sec，弃废液。注：确保漂洗液 W 已添加无水乙醇。

7. 重复一遍步骤 6。

8. 将 DNA 吸附柱 S2 放回收集管，空柱 12,000rpm 室温离心 2min，以除去残留的漂洗液 W。

9. 将 DNA 吸附柱 S2 放入新的 1.5mL 离心管中，在膜中央加入 50-150µL 洗脱液，室温放置 5min。然后 12,000rpm离心 1min。收集滤液，即为 DNA 溶液。

注：可通过以下方式提高回收产量：

①65℃预热洗脱液；

②将 DNA 滤液再次上柱，室温放置 2min 后，洗脱。

10. DNA 溶液可置于-20℃长期保存。

注意事项：

1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

2. 裂解液 LB 和结合液 BD 低温时可能析出，可 70℃温浴复溶至溶液澄清，不影响使用效果。

3. 杂质去除剂和结合液 BD 含有刺激性物质，为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

运输及保存：

1. Part I 组分冰袋运输，4℃可保存 12 个月，-20℃保存 2 年。

2. Part II 组分常温运输，常温保存，有效期 12 个月。