动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒

产品货号：26221

 产品规格：50T/100T 

产品简介：本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和*的缓冲液系统，提取革兰氏阳性菌基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司*新型材料，能够高效专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。 

产品组成：试剂名称 50T 100TRNase A 1ml 1ml×2蛋白酶 K 1ml 1ml×2溶液 A 10ml 20ml溶液 B 10ml 20ml漂洗液 15m1 15ml×2洗脱液 10m1 20m1吸附柱 50 个 100 个收集管 50 个 100 个 

操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 

1. 样品的处理：

   a、细胞：取 1×106 -1×107 个悬浮培养细胞，12000rpm 离心 1min 收集细胞，贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处理，再用预冷的 PBS 吹打成细胞悬液，然后 12000rpm 离心 1min 收集细胞，尽量除去上清，加 200ul 溶液 A，振荡至*混匀。

   b、组织：组织量不宜过大，一般不要超过 25mg，可以使用匀浆器匀浆，最好用液氮研磨成粉末状，再用预冷的PBS 或无菌水充分悬浮，然后 12000rpm 离心 1min 收集细胞，尽量除去上清，加 200ul 溶液 A，振荡至*混匀。

   2. 向悬浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml)，55℃放置 15min。

   3. 加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml )，充分颠倒混匀，55℃水浴消化，细胞消化时间较短，组织消化时间较长，一般需要 1-3 个小时才能完成（鼠尾需要消化过夜）。消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化*为止。 消化*的指标是：液体清亮及粘稠。

   4. 加入 200ul 体积溶液 B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可放置于 75℃15-30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不*，可能导致提取的 DNA 量少及不纯，还有可能导致堵塞吸附柱。5. 加入 200ul 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA 的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中。

   6. 12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

   7. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)， 12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

   8. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

   9. 12000rpm 离心 2min，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。

   10. 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm 离心 2min。

   11. 可将离心所得洗脱液再加入吸附柱中，12000rpm 离心 2min，即可得到高质量的基因组 DNA。

   注意事项:

   1. 试剂盒拆封后，RNase A 和蛋白酶 K 需放置-20℃保存

   2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。

   3. 如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。

   4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul，体积过小会影响回收效率：洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围)，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率。

   保存条件：室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期 12 个月，2-8℃保存时间更长。