哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒 返回列表页

哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒 

产品货号：11065

 产品规格：50T/100T

 产品简介：

 用分子生物学技术研究复杂的基因组，首先要求制备纯净的高分子质量DNA，一般分为两个步骤，先裂解细胞、溶解DNA，接着采用酶学或化学方法去除蛋白、RNA以及其他大分子。

尚宝生物 哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)采用经典的蛋白酶K处理法，可以抽提到100～150kb以上的基因组DNA，提取的基因组DNA可用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。该试剂盒的提取效率大致为，从1g组织可以提取到约150～200μg 100kb以上的基因组DNA，从10 ～10 Hela细胞可以提取到约5～50μg 100kb以上的基因组DNA。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

 产品组成：

 试剂盒内容 50T 100T 保存条件试剂(A): 样品裂解液 50ml 100ml 4℃试剂(B): 蛋白酶K溶液 150μl 300μl -20℃，避光试剂(C): 乙酸铵溶液 10ml 20ml 室温试剂(D): Nuclease Free Water 10ml 20ml 室温自备材料：1. 组织或培养细胞2. PBS3. 无水乙醇、70%乙醇4. 25:24:1 酚/氯仿/异戊醇 

操作步骤 (仅供参考) ：

 1. 准备样品：①组织样本：切下组织并立即剪成小块，置于液氮中冻结。将 100mg～1g 冻结的组织用预冷的研钵和研杵研碎或用锤子将其捣成碎末。培养细胞：收集贴壁生长或悬浮生长细胞培养液，贴壁生长细胞需先用胰蛋白酶消化液消化，再用 PBS 清洗一次。4℃离心机，1000～2000g 离心 1～2min，弃上清。用 1～10ml 预冷的 PBS 再次悬浮离心，如此 2 次洗涤。

 2. 每 1ml 样品裂解液加入 5μl 的蛋白酶 K 溶液，混匀。每 50mg 组织或 5×107 细胞用 0.5～0.6ml 样品裂解液悬浮，悬浮应*，不应留下结块。 

3. 充分混匀，50℃振荡下温育 12～18h 或过夜。

 4. 加入等体积 25:24:1 酚/氯仿/异戊醇，轻轻混合，尽可能减少对 DNA 的剪切。

 5. 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积酚/氯仿/异戊醇再抽提一次。重复该步骤 1 次。 

6. 吸取上层液(水溶液)250～300μl 至新 EP 管中，加入等体积无水乙醇和 1/4 体积的乙酸铵溶液，颠倒混匀数次。

 7. 4℃ 10000g 1min，弃上清。

 8. 加入 70%乙醇，4℃ 10000g 1min，弃上清。重复该步骤一次。

 9. 尽量吸除残余的乙醇，空气干燥，等到不到明显液体时，立即加入 50～100μl Nuclease Free Water 溶解 DNA，4℃或-20℃保存。注意：不可过分干燥基因组 DNA 沉淀，否则会极难溶解。如果发现 DNA 沉淀难以溶解，可以在 4℃用摇床缓慢摇动过夜，以溶解 DNA 沉淀。

 10. A 260 /A 280 处检测 DNA 纯度，高纯度的 DNA 一般 A 260 /A 280＞1.8。

 注意事项：

 1. 如果打算提取大片段的基因组 DNA，应尽量避免基因组 DNA 的物理性剪切。例如避免剧烈振荡含有基因组DNA 的样品，可以用剪掉枪头尖的枪头吸取基因组 DNA 的样品。

 2. 准备细胞样品时，如果细胞量过少(＜3×107 )，应 0.3ml 含蛋白酶 K 的样品裂解液。

 3. 为避免高分子质量 DNA 被剪切，可以不采用乙醇沉淀 DNA，可用透析袋替代乙醇：在 100 倍体积的 TE buffer中至少透析 2 次，所用取全部时间应＞24h。

 4. 不可过分干燥基因组 DNA 沉淀，否则会极难溶解。5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 有效期：6 个月有效。