RNA病毒基因组提取试剂盒 返回列表页

RNA病毒基因组提取试剂盒 

产品货号：26239 

产品规格：50T/100T 

产品简介： 

本试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因组，不适合于细胞等组织内RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组RNA可用于RT-PCR实验。产品组成：试剂名称 50T 100T蛋白酶 K 1ml 2ml洗柱液 50ml 50ml×2结合液 25ml 50ml漂洗液 15ml 15ml×2RNase free ddH2O 15ml 15ml×2RNase free 吸附柱 50 个 100 个RNase free 收集管(2ml) 50 个 100 个 

操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入一瓶新开启的无水乙醇，加入到离瓶口约 0.5-1cm 距离，盖好摇匀。所有离心步骤均在 2-8℃条件下进行。

 1. 取病毒上清液 0.5ml，12000rpm 离心 5min，尽量吸尽上清使用，弃去沉淀（如无沉淀可省去此步）。

 2. 向病毒上清中加入 20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K，充分混匀，65℃消化 10min，期间可颠倒离心管混匀数次。

 3. 吸附柱前处理：从包装中取出吸附柱，放入收集管中，加入 700ul 洗柱液，室温放置 2 分钟，2-8℃12000rpm离心 2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中待用。

 4. 向病毒上清中加入 500ul 结合液，充分混匀。再向管中加入 400ul 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 RNA 的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，静置 2min。（吸附柱的最大容积为750ul，可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。）

 5. 12000rpm 离心 2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

 6. 向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

 7. 向吸附柱中加入 500ul 漂洗液，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。 

8. 12000rpm 离心 2min，将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。

 9. 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50ul-100ul经65℃水浴预热的RNase free ddH2O，室温放置 5min，12000rpm 离心 2min。即可得到高质量的病毒基因组 RNA。

 注意事项：

 1. 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致 RNase 污染。使用无 RNase 的塑料制品和 枪头避免交叉污染。 

2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 RNA 提取量也下降。 

3. 若结合液中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解。

 4. 如果样品消化不*，后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况，可适当延长离心时间。

 5. 洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul，体积过小会影响回收效率。

 6. RNA 产物应保存在-70℃，以防 RNA 降解。

 7. RNA 检测：得到的基因组 RNA 片段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。由于病毒不含有核糖体RNA，所以常规电泳无法检测，只有后期实验才可检测到。D260 值为 1 相当于大约 40 μg/ml 单链 RNA。 

保存条件：室温（15℃-25℃）干燥条件下可保存 12 个月，更长时间的保存可置于 2℃-8℃。