柱式细胞基因组提取试剂盒 返回列表页

柱式细胞基因组提取试剂盒

产品货号：28104

产品规格：50次/100次/200次

产品简介：

　  柱式细胞基因组提取试剂盒适合于从哺乳动物细胞中提取高纯度总DNA。本品可纯化获得分子量最大为50 kb的DNA片段，纯化过程不需使用苯酚或氯仿等有毒溶剂，无需乙醇沉淀。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上，PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

包装清单：

自备试剂：使用前Buffer PW 50次加入36ml无水乙醇/100次加入72ml无水乙醇/200次加入144ml无水乙醇。

操作步骤：

材料处理：

1. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液（最大提取量为5×10⁶个细胞），2000rpm（400×g）离心5分钟，弃尽上清，加200 μl Buffer GL，振荡至样品*悬浮。

2. 如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl的浓度为100 mg/ml的RNase A溶液，涡旋15秒。剧烈涡旋震荡并用移液器吹打充分混匀，室温放置5-10分钟。

3. 柱平衡：向已装入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入200μl Buffer PS，12000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

4. 将步骤3所得溶液短暂离心，全部加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000 rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

5. 向吸附柱中加入450 μl Buffer PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。  注意：如果纯化的DNA用于盐敏感的实验（例如平末端连接或直接测序），建议加入Buffer PW静置2-5分钟再离心。

6. 重复步骤5。

7. 12000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。8.将吸附柱放到一个新的1.5 ml离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加50μl Buffer EB，室温放置2分钟。12000 rpm离心1分钟，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

注意：1）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5之间（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。2）为了提高基因组提取量，可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中，室温放置2分钟，12000 rpm离心1分钟。3）洗脱体积不应小于30μl，体积过少会影响回收效率。

注意事项 ：

1. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。

2. 所有离心步骤均可室温下进行。