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血液/细胞/组织基因组 DNA 提取试剂盒（离心柱型）

产品货号：26151

 产品简介：本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱和*的缓冲液系统，提取多种细胞中的基因 DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司*新型材料，高效、专一吸附 DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组 DNA 片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、 Southern 杂交等实验。

 包装清单：产品名称 50 次 200 次缓冲液 GA（Buffer GA） 15 ml 50 ml缓冲液 GB（Buffer GB） 15 ml 50 ml缓冲液 GD（Buffer GD） 13 ml 52 ml漂洗液 PW（Buffer PW） 15 ml 50 ml洗脱缓冲液 TE（Buffer TE） 15 ml 60 mlProteinase K 1 ml 4×1 ml吸附柱 CB3 （Spin Columns CB3） 50 个 200 个收集管（2 ml）（Collection Tubes 2 ml） 50 个 200 个选配试剂：红细胞裂解液(Red Cell Lysis Buffer 目录号：T16121)；RNase A（100 mg/ml）。 

储存条件：该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存 12 个月，更长时间的保存可置于 2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在 37℃水浴中预热 10 min，以溶解沉淀。 

提取得率：材料 提取量 DNA 得量哺乳动物全血 100-400 μl 3-10 μg禽类、两栖类全血 5-20 μl 5-40 μg动物细胞培养液 106 -107 cells 5-30 μg动物组织 30 mg 10-30 μg产品特点：简单快速：1 h 内即可获得超纯的基因组 DNA。广 泛：适用于血液、多种动物细胞和动物组织等。超 纯：获得的 DNA 纯度高，可直接用于 PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。操作步骤：使用前请先在缓冲液 GD 和漂洗液 PW 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

 1.处理材料a.如提取材料为血液，可直接使用 200 μl 新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足 200 μl 可加缓冲液 GA 补足。 

注意：如需处理更大体积血液，如 300 μl-1 ml，应按以下步骤操作：在样品中加入 3 倍体积红细胞裂解液（例如，300 μl 血液加入 900 μl 红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置 5 min，期间再颠倒混匀几次。10000 rpm（~11,500×g）离心 1 min（若离心机最高转速不允许，可 3000 rpm（~3,400×g）离心 5 min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加 200 μl 缓冲液 GA，振荡至*混匀。红细胞裂解液本公司另外有售（目录号：T16121）。b.如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量 5-20 μl，可加缓冲液 GA 补足 200 μl 后进行下面的裂解步骤。c.贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后 10,000 rpm（~11,200×g）离心 1 min，倒尽上清，加 200 μl缓冲液 GA，振荡至*悬浮。d.动物组织（脾组织用量应少 10 mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后 10,000rpm（~11,200×g）离心 1 min，倒尽上清，加 200 μl 缓冲液 GA，振荡至*悬浮。注意：如果需要去除 RNA，可加入 4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：R42462），振荡15 sec，室温放置 5 min。

 2.加入 20 μl Proteinase K 溶液，混匀。a.提取血液基因组时，只需加入 Proteinase K 混匀，即可继续进行下一步。b.提取细胞基因组时，只需加入 Proteinase K 混匀，即可继续进行下一步。c.提取组织基因组时，加入 Proteinase K 混匀后，在 56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。注意：不同组织裂解时间不同，通常需 1-3 h 即可完成（鼠尾需要消化过夜）。不会影响后续操作。每小时颠倒混合样品 2-3 次，用水浴振荡器也可。 

3.加入 200 μl 缓冲液 GB，充分颠倒混匀，70℃放置 10 min，溶液应变清亮，简短离心以去 除管盖内壁的水珠。注意：加入缓冲液 GB 时可能会产生白色沉淀，一般 70℃放置时会消失，不会影响后续实 验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不*，可能导致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不纯。当血液体积≤200 μl 且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜 色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。

 4.加人 200 μl 无水乙醇，充分振荡混匀 15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。 

5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱 CB3 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CB3 放回收集管中。 

6.向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CB3 放入收集管中。

 7.向吸附柱 CB3 中加入 600 μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 sec，倒掉废液，将吸附柱 CB3 放入收集管中。

 8.重复操作步骤 7。

 9.将吸附柱 CB3 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min，倒掉废液。将吸附柱 CB3 置于室温放置数分钟，以*晾干吸附材料中残余的漂洗液。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续 的酶反应（酶切、PCR 等）实验。

 10.将吸附柱 CB3 转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200 μl 洗脱缓 冲液 TE，室温放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min，将溶液收集到离心管 中。

 注意：洗脱缓冲液体积不应少于 50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的 pH 值对于洗 脱效率有很大影响。若用 ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；且 DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。为增加基因组 DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱 CB3 中，室温放置 2 min，12,000 rpm（~13,400×g）离心 2 min。

 注意事项 ：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

 1.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液 GD 和漂洗液 PW 中加入无水乙醇。

 2.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。

 3.若缓冲液 GA 或 GB 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

 4.所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。