离心柱式血液基因组提取试剂盒 返回列表页

离心柱式血液基因组提取试剂盒

产品货号：28103

产品规格：50 次/100 次/200 次

产品简介：

       离心柱式血液基因组提取试剂盒采用高盐法提取血液中的基因组 DNA，可大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取 的基因组 DNA 的片段大，纯度高，质量稳定可靠。

  使用离心柱式血液基因组回收的 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。 自备试剂：无水乙醇。使用前 Buffer PW50 次加入 39ml 无水乙醇/100 次加入 77ml 无水乙醇/200 次加入 144ml 无水乙醇

包装清单：   

操作步骤：

以下步骤以提取 2mL 血液中基因组为例，具体实验可根据血液量等比例减少。

1. 于离心管中加入 2mLBuffer A 和 2mL 预冷的超纯水。上下颠倒 6-8 次，冰上孵育 2-3min。

2. 3500rpm 离心 15min，弃上清。

3. 加入 150μl Buffer B，剧烈涡旋 30-60s 至沉淀重新散裂，加入 5μl Proteinase K 溶液，充分颠倒混匀，56℃放 置 10 min，其间颠倒混匀数次，溶液应变清亮（如溶液未*变清亮，请延长裂解时间至溶液清亮为止）。

注意：加入缓冲液 Buffer B 时可能会产生白色沉淀，一般 37℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变 清亮，说明细胞裂解不*，可能导致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不纯，需等比例补加 Buffer B 及 Proteinase K。当血液体积≤200μl 且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶 液中没有团块等沉淀。

4. 加入 3 倍体积的 Buffer PG（约 0.45mL），涡旋充分混匀。

5. 柱平衡：向已装入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入 200μl Buffer PS，12000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

6. 将步骤 3 所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置 2 分钟，12000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管 中的废液，将吸附柱放回收集管中（如步骤 3 所得溶液体积过大，可分次加入吸附柱中，12000 rpm 离心 1 分钟，弃流穿液）。

7. 向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

注意：如果纯化的 DNA 用于盐敏感的实验（例如平末端连接或直接测序），建议加入 Buffer PW 静置 2-5 分钟 再离心。

8. 重复步骤 6。

9. 12000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR 等）。

10. 将吸附柱放到一个新的 1.5 ml 离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加 50μlBuffer EB，室温放置 2 分钟。12000 rpm 离心 1 分钟，收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。

注意：

1) 洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其 pH 值在 7.0-8.5 之间（可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围）。

2) 为了提高基因组提取量，可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中，室温放置 2 分钟，12000 rpm 离心 1 分钟。

3) 洗脱体积不应小于 30μl，体积过少会影响回收效率。

注意事项：

1. *使用前应按照试剂瓶标签的说明在 Buffer PW 中加入无水乙醇。

2. 若 Buffer B 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

3. 所有离心步骤均可室温下进行。