水产霉菌测试

场景 A：水产制品（鱼干、鱼糜、即食水产）食品安全霉菌计数，国标 GB 4789.152016《霉菌和酵母计数》，测样品里霉菌总数 CFU/g；

场景 B：病鱼水霉 / 丝囊霉（水产病害），取病灶组织，做镜检 + 分离培养 + 鉴定（OIE 水产病害诊断）。

一、水产制品霉菌总数（GB4789.15，常规质检）

1. 仪器耗材

无菌均质袋、拍击均质器、无菌生理盐水、PDA 马铃薯葡萄糖琼脂（加氯霉素，抑制细菌）、DRBC 孟加拉红培养基（推荐，抑制霉菌蔓延）、霉菌培养箱、无菌平皿、移液枪、放大镜。

2. 操作步骤

1）样品制备（无菌操作） 无菌称取 25 g 水产样品，放入含 225 mL 无菌生理盐水 的均质袋，拍击均质 1～2 min，得到 1:10 基础匀液。 做10 倍梯度稀释：10⁻²、10⁻³……，根据预估污染程度选择合适稀释度。

2）接种倾注 每个稀释度取 1 mL 匀液，加到 2 个无菌平皿；空白对照：1mL 无菌生理盐水。 倒入冷却至 46℃左右的 PDA/DRBC 培养基，轻轻摇匀，平放待凝固。

3）培养 平板倒置放入霉菌培养箱：28℃±1℃，培养 5 天；期间可观察，防止毛霉等快速蔓延长满平板无法计数。

4）菌落计数 选取平板霉菌菌落 10～150 CFU 的稀释度，分别统计霉菌 / 酵母；蔓延长满平板记为多不可计；取 2 块平板平均值，换算单位：CFU/g。

DRBC 培养基优势：限制霉菌菌丝蔓延，水产高水分样品优先选 DRBC，PDA 多用于纯化和形态鉴定。

5）可选：菌种鉴定 挑取单菌落，纯化培养，镜检看分生孢子、菌丝形态；也可 ITS 测序鉴定到种（曲霉、青霉、根霉等）。

二、病鱼水霉 / 丝囊霉菌（水产病害检测，水霉 Saprolegnia、侵入丝囊霉）

多用于鱼苗、溃疡病鱼，不是食品霉菌总数，是病原真菌检测

取样：取鱼体表白色棉絮病灶 / 溃疡交界组织，无菌取样；体表先用 75% 酒精简单消毒，避免体表杂菌干扰。

直接压片镜检（快速初筛）：病灶组织滴无菌水，盖玻片，显微镜下看无隔菌丝、孢子囊，看到典型菌丝即可初步判定水霉。

分离培养：SDA 沙氏葡萄糖琼脂（加抗生素抑制细菌），20～25℃培养 5～10 天；水霉低温更适合，和食品霉菌 28℃不一样PMC。

鉴定：形态学（菌丝、游动孢子）；怀疑丝囊霉可用PCR 分子检测（ITS 特异性引物），OIE 标准方法。

三、关键控制要点（水产样品特别注意）

水产高蛋白高水分，细菌极多，培养基必须添加氯霉素 / 抗生素抑制细菌，不然细菌长满覆盖霉菌。

干制水产（鱼干、虾皮）霉菌容易蔓延，优先 DRBC；鲜水产、鱼糜可用 PDA。

样品前处理全程无菌，样品不能室温久放，尽快均质接种；

培养箱湿度：建议 RH80~90%，防止平板培养基干裂。

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