小鼠嗅球原代细胞

小鼠嗅球原代细胞

小鼠嗅球细胞分离自嗅球组织；嗅球是脊椎动物前脑结构中参与嗅觉的部分，用于感知气味。嗅球分为二个不同的结构：主嗅球及辅助嗅球。在大脑额叶来自许多嗅细胞的纤维缠集在一起，形成线球状的部分。在这里，纤维与多个次级元——僧帽细胞的树突相连接，进而由这里伸出纤维形成嗅囊，终止于额叶下方。一般认为它在嗅味的辨别中具有重要的功能。对于大部份的脊椎动物而言，嗅球位在大脑的前面，不过人的嗅球位于大脑的内部。嗅球由筛骨的筛板固定且保护嗅球，哺乳动物的筛板会分隔嗅球和嗅上皮，而嗅会穿过筛板中的筛孔而连接到嗅球。嗅球分为二个不同的结构：主嗅球及辅助嗅球。

产品名称：小鼠嗅球细胞

组织来源：嗅球

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

包被条件：PLL（0.1mg/ml）

培养基：含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2天半量换液1次

生长特性：贴壁

细胞形态：元细胞样

传代特性：不传代，不增殖，存活1-2周

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

小鼠嗅球细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

方法简介

实验室分离的小鼠嗅球采用消化法结合元专用培养基培养、化学试剂抑制法筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠嗅球经MAP-2免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。