单细胞及微量样本的DNA甲基化组学研究很大程度上受制于建库测序技术。传统的文库构建方法或类似于基因组DNA的单细胞扩增技术很难应用到甲基化实验过程中。易基因建立了基于线性扩增和单管建库的技术,可充分降低文库偏好性,准确的完成珍贵样本的全基因组甲基化研究。
单细胞及微量样本的甲基化研究主要应用于肿瘤发生机制,癌症研究,胚胎植入前诊断,胚胎早期发育,生殖细胞重组,干细胞及细胞异质性等研究领域。应用的样本包括单细胞、微量细胞等。
技术优势:
Ø 超低起始量:仅需大于5ng的DNA或微量的细胞;
Ø 样本种类繁多:细胞、FFPE、cfDNA;
Ø 单碱基分辨率:可精确分析每一个C碱基的甲基化状态。
实验策略:
分析内容:
注:个性化分析、多组学关联分析请联系对接销售或技术支持
送样要求:
送样要求 | 项目周期 |
Ø 大于5ng的DNA或微量的细胞; Ø DNA纯度:OD260/280=1.8-2.0; Ø 扩增技术:随机引物扩增技术; Ø 测序深度:≥ 30x
| 20个样本以下标准流程的运转周期约为36个工作日。遇到样本数目较多时,项目周期需要与技术支持人员确定。 |
经典案例
微量细胞样本Micro DNA-BS绘制猴子植入前胚胎发育中的DNA甲基化图谱
Gao F, et al. De novo DNA methylation during monkey pre-implantation embryogenesis. Cell Res. 2017 Apr;27(4):526-539. pii: cr201725.
1、背景
可能由于技术上的限制,还没有研究揭示早期胚胎发育过程中的全基因组DNA再甲基化。
2、方法
利用具有超低DNA起始量(100个细胞)的微量细胞全基因组DNA甲基化测序技术(Micro DNA-BS)绘制灵长类动物(恒河猴,Macaca mulatta)植入前胚胎发育的全基因组甲基化图谱。
3、结论
本研究使用Micro DNA-BS对猴子早期胚胎发育过程的5mC进行单碱基分辨率、高覆盖率的甲基化分析。分析结果鉴定了发育过程中的全基因组DNA去甲基化和从头甲基化,特别是在从2细胞到8细胞阶段的过渡期间,研究全面阐明了DNA甲基化动力学的“兴衰”。此外,DNA甲基转移酶敲降实验表明,异常的DNA甲基化会影响灵长类动物早期胚胎的正常发育。本研究结果进一步完善了目前关于哺乳动物DNA甲基化重编程的知识体系,并为未来灵长类动物胚胎发育的研究提供了宝贵的数据资源。
成对比较揭示植入前胚胎发育过程中全基因组DNA去甲基化和从头甲基化
参考文献:
① DOI:10.1038/cr.2017.25