Annexin V-FITC / PI双染凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC / PI双染凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC / PI双染凋亡检测试剂盒

检测原理

实验操作指南步骤 

一步法

1．细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300 g 离心 5 min，弃上清，收集细胞，PBS 洗涤一次，轻轻重悬细胞并计数。注：本品仅在悬浮培养的细胞中验证，良好的细胞状态是实验的关键。贴壁生长的细胞用于凋亡检测时，可能会因为胰酶消化、吹打等处理导致细胞的坏死或凋亡，对实验结果可能存在不可控的影响，请谨慎处理。

 2．取 1~5 × 105重悬的细胞，300 g 离心 5 min，弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入 500 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer 工作液重悬细胞。 

3．细胞悬液中加入 5 μL 的 Annexin V-FITC 和 5 μL 的 PI 染色液。 

4．轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 15~20 min。

5．反应完成后立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于 1 小时内完成检测。注：a)流式细胞仪检测请取阴性样本（如未经药物处理的活细胞）进行 Annexin V-FITC 和 PI 双染，作为阴性对照；另取阳性样本（如毒性药物处理的细胞）分别进行 Annexin V-FITC 和 PI 单染，作为调节荧光补偿的单阳对照。b)流式细胞仪检测时 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，PI 优先选择 PerCP/Cy5.5 通道，其次是 ECD 通道。

两步法 

1．细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300 g 离心 5 min，弃上清，收集细胞，PBS 洗涤一次，轻轻重悬细胞并计数。注：本品仅在悬浮培养的细胞中验证，良好的细胞状态是实验的关键。贴壁生长的细胞用于凋亡检测时，可能会因为胰酶消化、吹打等处理导致细胞的坏死或凋亡，对实验结果可能存在不可控的影响，请谨慎处理。 

2．取 1~5 × 105重悬的细胞，300 g 离心 5 min，弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入 100 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer 工作液重悬细胞。 

3．细胞悬液中加入 2.5 μL 的 Annexin V-FITC 和 2.5 μL 的 PI 染色液。（由于两步法分辨率更高，染色液用量减半依然可得到媲美一步法的效果；用户亦可根据自己的模型进行滴定后加入适量的染色液，用更少的量获得高质量的结果。）4．轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 15~20 min。 

5．加入 400 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer，混匀样本。

 6．立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于 1 小时内完成检测。注：a)流式细胞仪检测请取阴性样本（如未经药物处理的活细胞）进行 Annexin V-FITC 和 PI 双染，作为阴性对照；另取阳性样本（如毒性药物处理的细胞）分别进行 FITC 和 PI 单染，作为调节荧光补偿的单阳对照。b)流式细胞仪检测时 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，PI 优先选择 PerCP/Cy5.5 通道，其次是 ECD 通道。