材料:淋巴细胞株悬液、1%SRBC悬液、灭活之小牛血清、离心管、试管、吸管、载玻片、0.8%戊二醛、瑞氏染液。
方法
(1)取上述配好之淋巴细胞悬液0.1ml于洁净小试管中,加入1%SRBC悬液0.1ml。再加入小牛血清0.1ml,混匀,置37℃水浴箱中5分钟,500转/分,离心5分钟,放4℃冰箱2-24小时。
(2)从冰箱中取出试管,留适量上清液,轻轻摇匀,加0.8%戊二醛2滴,轻摇后,置4℃冰箱15分钟,取出,作成涂片,待自然干燥,以瑞氏染液染色。
(3)计数:镜下观察,凡结合三个以上SRBC的T细胞株即为E-RFC,计数200个淋巴细胞,求出E-RFC占淋巴细胞总数的百分率。
结果
一般认为E-RFC的正常值在60%以上,如少于50%则为低下。如欲分离T细胞,可用密度梯度离心,E-RFC因比重增大而沉于管底,与其他细胞株分离;用低渗法裂解花结中的SRBC,即可获得纯化的T细胞。
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